Так или иначе, большинство исследований лекарственных средств проводилось с использованием ретроспективного контроля, иногда с несбалансированными гендерными соотношениями, и никакое лечение не доказало своей эффективности в рандомизированном контрольном исследовании. В мармосетевой модели лечение LPV/RTV показало незначительное улучшение клинического и патологического исхода, а также снижение вирусной нагрузки.
Однако, из-за различных патологических последствий лечения и необработанной группы, вирусные титры измерялись в разные моменты времени после заражения, и все эксперименты проводились с относительно небольшим количеством (n = 3) однополых (самцов) животных. Было показано, что атипичная пневмония (SARS-CoV) и бактериальная инфекция (MERS-CoV) сильно различаются по возрасту и полу, при этом в клинических случаях и на моделях мыши старшие и самцы испытывают более тяжелые осложнения, чем самки. В одном случае, пожилой пациент пережил тяжелую MERS-CoV инфекцию, используя комбинированную терапию LPV/RTV, IFN1α и рибавирина. Продолжающиеся клинические испытания в Саудовской Аравии начали использовать комбинацию LPV/RTV и IFNβ-1b для лабораторно подтвержденной MERS-CoV инфекции (NCT02845843). Учитывая важность жизненного цикла вируса 3CLpro I, он является привлекательным объектом для разработки новых лекарственных средств.
Аналоги нуклеозидов и ингибиторы RdRp
Рибавирин является гуанозиновым аналогом, который нацелен на РНК-зависимые РНК-полимеразы (RdRp) и обладает широкой эффективностью против РНК-вирусов. Препарат ингибирует синтез вирусной РНК и показал эффективность против HCV и RSV. Рибавирин ингибирует репликацию SARS-CoV и MERS-CoV в высокой концентрации in vitro, однако рибавирин усиливает репликацию вируса в легком мыши и продлевает вирусную персистентность в модели мыши с SARS-CoV. Несмотря на то, что рибавирин не эффективен в качестве монотерапии, он показывает синергетический эффект против SARS-CoV и MERS-CoV в сочетании с IFN. В макак-резус модели, инфицированные MERS-CoV обезьяны показывают улучшение после лечения рибавирином и IFN-α2b. Кроме того, рибавирин применялся в клинических условиях во время вспышек атипичной пневмонии (SARS-CoV) и MERS-CoV. В то время как некоторые исследования показывают положительный результат после лечения рибавирином + ИФН, другие не предполагают существенного улучшения. В связи с различиями в дозировке и времени приема, а также отсутствием контроля, эффективность применения рибавирина у пациентов является неубедительной. Механически исследования показывают, что рекомбинантная КВ с удаленными корректирующими экзонуклеазами N (ExoN) демонстрирует более высокую чувствительность к рибавирину. Эти результаты косвенно указывают на то, что низкая активность рибавирина в CoV может быть объяснена наличием корректирующих экзонуклеаз N (ExoN, nsp14), которые могут вырезать препарат из вирусной мРНК в CoV.
Два нуклеозидных аналога, β-D-N4-гидроксицитидин (NHC) и GS-5734 (ремдезивир), показали высокую эффективность против CoV и менее чувствительны к ExoN. NHC является цитидиновым аналогом, и недавно было показано, что он ингибирует несколько вирусов, включая вирус гриппа, RSV и вирус Эбола (Reynard et al., 2015; Urakova et al., 2017; Yoon et al., 2018). Он имеет микромолярный EC50 в отношении как альфа, так и бета CoV, включая SARS-CoV и MERS-CoV. В настоящее время в стадии клинических разработок для вирусов Эбола, ремдесивир является нуклеозидным пролекарственным средством, которое эффективно против множества других РНК-вирусов, включая вирусы Nipah, RSV и CoV (Lo et al., 2017; Sheahan et al., 2017). Ремдезивир имеет концентрации субмикромолярного ингибирования в широком диапазоне CoVs, включая SARS-CoV, MERS-CoV и hCoV-NL63, а также препандемические CoVs WIV1 и SHC014 летучих мышей в модели эпителия дыхательных путей человека in vitro (HAE) (Sheahan et al., 2017; Agostini et al., 2018). Профилактическое введение (однодневная пре-инфекция) ремдесивира может смягчить болезнь за счет снижения вирусного титра и патологии легких у смертоносных моделей мышей с помощью адаптированного для мыши SARS-CoV MA15. Ремдесивир также проявляет терапевтическую активность при раннем введении на один день после заражения (что соответствует 7-10 дням после появления симптомов инфекции у человека). Однако лечение, начатое через два дня после заражения, не улучшает исход заболевания, хотя модель мышечной болезни более сжата, чем у человека. Важно отметить, что ремдезивир демонстрирует превосходную профилактическую защиту. Макаки резуса полностью защищены от MERS-CoV инфекции, что подтверждается легочной патологией и клиническими показателями, а также замедленным вирусным ростом. Терапевтическое лечение после 12-часовой инфекции показывает умеренное улучшение клинических результатов на NHP. Родительский нуклеозид ремдесивира GS-441524 также показал свою эффективность в лечении ФИПВ - заболевания, вызванного α-CoV ФИПВ. В настоящее время NHC и ремдесивир являются единственными широко эффективными противовирусными препаратами против всех ТОРС-подобных, МЕРС-подобных, современных и животных КВ. Некоторые противовирусные препараты, такие как хлорохин и Т-705, также демонстрируют эффективность in vitro и находятся в стадии рассмотрения на предмет нынешней вспышки КОВИД-19.
