Уважаемые коллеги, обращаю Ваше внимание, что здесь представлен алгоритм исследования спермограммы, которому меня научили мои коллеги. Если Вы ас и заметили ошибку, напишите это в комментариях, будем обсуждать вместе.
Алгоритм исследования.
При поступлении на баночку с материалом пишем время поступления и отправляем в термостат на 30 минут минимум - 1 ч максимум. В этом промежутке, от 30 минут до 1 часа после инкубации в термостате лучше всего проводить исследование.
1. Вязкость. Берем пипетку Пастера и определяем, вязкая или нет. Невязкая сперма вытекает каплями. Тогда пишем вязкость менее 0,1 см и время разжижения менее 60. Вязкая будет тянуться, тогда пишем вязкость более 2 см и время разжижения более 60.
2. Объем - измеряем пипеткой Пастера.
3. Цвет: молочно-желтый, серо-молочный
4. рН - полоской.
5. Берем дозатор на 10 мкл и 2 предметных стекла. На одно предметное стекло наносим 2 капли: слева и справа по 10 мкл спермы. Во вторую каплю справа добавляем эозин в соотношении 1:1. Обе капли накрываем покровными стеклышками. На второе предметное стекло справа капаем 10 мкл спермы и покровным стеклышком делаем мазок. Стекло подписываем и отставляем сушиться на открытом воздухе. В эппердорф наливаем 190 мкл дистилированной воды и добавляем 10 мкл спермы, пипетируем. Это для камеры Горяева.
6. Микроскопия. Начинаем с нативного мазка (капля слева). Ищем поле на 100х, ищем агглютинацию и агрегацию. Агглютинация бывает очень редко. В основном либо будет агрегация (она оценивается в крестах), либо не будет ничего. Агрегаты не в каждом поле зрения - один +, в нескольких полях - ++, более - +++. Затем переводим на увеличение 400х и и считаем % прогрессивно-подвижных (те, что убегают из поля зрения), % непрогрессивно-подвижных (те, что шевеляться, но стоят на месте) и % неподвижных сперматозоидов. В агглютанатах и аггрегатах сперматозоиды не считаем. Считаем % - это значит считаем на 100 клеток. Лучше отбивать на счетчике и начинать считать сначала прогрессивно-подвижные, а потом неподвижные. Разницу записывать в непрогрессивно-подвижные. Если тяжело считать все поле - разделите поле на 4 части и считайте сначала 1/4 поля, затем еще 1/4 и так до 100 клеток. Затем посчитайте общую подвижность: прогрессивно-подвижные + непрогрессивно-подвижные. Параллельно смотрим количество лецитиновых зерен, оцениваем как в секрете простаты (единичные, немного, умеренно, большое количество). Ищем клетки сперматогенеза (похожи на с/я нейтрофилы, но чуть крупнее). Пишем всегда хотя бы 1. Некоторые коллеги пишут всегда 2-4, даже когда не нашли не одной. Как правильно, сами решайте. Если сперматозоидов совсем нет, но необходимо весь объем спермы отцентрифугировать (вроде 15 минут при 3000 об), взять осадок под микроскоп и если и там ничего нет, то в комментариях указать, что после центрифугирования пробы сперматозоиды не найдены. Тогда у вас почти во всех показателях будут прочерки.
7. Исследуем жизнеспособность - на увеличении 400х микроскопируем правую каплю с эозином. Жизнеспособные сперматозоиды имеют светлые, блестящие (преломляют свет) чуть зеленоватые головки. Нежизнеспособные - окрашиваются в розоватый цвет. Считаем на 100 клеток, отбиваем на счетчике. Подсказка: жизнеспособность должна быть всегда чуть больше общей подвижности. Если общая подвижность 70%, например, прибавьте хотя бы 1, если получилось тоже 70 жизнеспособных.
8. Считаем общее количество сперматозоидов. Заправляем камеру Горяева (см пункт 4), на 100х ищем сетку и переводим на 400х. Считаем сперматозоиды по диагонали в 5 квадратах, разделенных в мелкую сетку (В Нечипоренко мы считаем в больших квадратах, а квадраты с мелкой сеткой пропускаем). Результат (концентрация сперматозоидов) умножаем на объем спермы и получаем общее количество сперматозоидов. Если будете сравниваться с коллегами, то обращайте внимание, попали ли вы вместе в норму или в патологию. Если попали, то нормально, а какая цифра неважно, так как по-разному заправляли камеру и брали разные капли материала, цифра не совпадет в любом случае. Далее считаем количество лейкоцитов и эритроцитов. Считаем по горизонтали в 5 больших квадратах, как Нечипоренко (только не все большие квадраты, а 5 квадратов по горизонтали - одну линию) и результат умножаем на 62500 и делим на 1 000 000. Получившаяся цифра - количество лейкоцитов. Эритроциты считаем так же в 5 квадратах по горизонтали, но в поле зрения. Сколько штук увидели, столько и записали.
9. Окрашиваем мазок, который уже подсох. Ставим 3 баночки (для мочи): 1 - с фиксатором, 2 - с эозином, 3 - с синькой. Каждый мазок сначала окунаем 3 раза в фиксатор (плавно опускаем вертикально в жидкость, погружаем мазок полностью и сразу плавно вытаскиваем. Так 3 раза). Промакаем нижний край о салфетку и окунаем каждый мазок во 2 баночку с эозином тоже 3 раза. Промокаем нижний край салфеткой от лишней краски и окунаем каждый мазок в синьку 5 раз таким же способом. Промокаем салфеткой лишнюю краску с нижнего края стекла и сушим на сушилке горизонтально или стоя вертикально (прислонив к чему-то) на открытом воздухе около 20 минут.
10. Микроскопируем окрашенный препарат. Считаем на 100 клеток: нормальные сперматозоиды, патологию головки, шейки и хвоста. Нормальных будет мало, так как при выходе из головки полового члена сперматозоиды деформируются. 4 нормальных - это уже много (мне так говорили). Патологию сложно описать словами, так что смотрите методичку по спермограмме, там есть картинки. Если коротко: головка на 40-50% должна быть светлой. Она не должна быть вся темная, вытянутая, слишком круглая. Патологию шейки видно сразу. Хвост не должен быть в изломах, не должен быть закручен, не должен отсутствовать.
11. Пишем заключение. В норме будет нормозооспермия. Если патология: азооспермия, тератозооспермия, криптозооспермия, пиосмермия, гемотоспермия и т. д. Когда формируете заключение, проверяйте себя несколько раз, важно не ошибиться и ничего не пропустить.
Пример бланка (мой черновик):
Друзья! Надеюсь, вам поможет этот алгоритм в работе. Если понравилось и хотелось бы еще чему-то научиться, предлагайте темы. Что знаю - расскажу.
