1.Морфологическое
Морфологический анализ клеток КМ и определение процентного содержания форменных элементов КМ.
Окраска: гематоксилин-эозин, по Романовскому Гимзе
Недостаток: морфологически нераспознаваемыми являются стволовые клетки, полустволовые клетки, унипотентные клетки( ВСЕ ДО БЛАСТОВ)
2.Цитохимическое исследование
Метод основан на использовании цветных химических реакций для определения в клетках метаболически активных ферментов и субстратов
На углеводы: ШИК/Pas-реакция
Наибольшее количество гликогена в зрелых клетках гранулоцитарного ряда.
Миелопероксидаза
маркер клеток НФ-ряда, располагаются в первичных лизосомальных гранулах.Наибольшее количество в промиелоцитах
Неспецифические эстеразы
Альфа и хлорацетатэстераза
Реакция на альфа-нафтилацетатэстеразу
может быть положительной в нейтрофилах, эозинофилах, лимфоцитах, однако она не подавляется фторидом натрия.
Наибольшая активность альфа-НЭ определяется в моноцитах, в которых присутствует изоформа фермента, подавляемая фторидом натрия. Активность фермента выявляется в виде гранул темно-бурого цвета в цитоплазме.
Хлорацетатэстераза, как МП, является маркером нейтрофилов и выявляется уже на стадии миелобласта.
Активность хлорацетатэстеразы возрастает у промиелоцитов и миелоцитов, т.е. по мере созревания клетки. Активность фермента выявляется в реакции Яма в виде гранул синего цвета в цитоплазме.
Сдвоенную реакцию на ХАЭ и альфа - НЭ проводят последовательно на одном мазке. Это позволяет разделить клетки гранулоцитарной и моноцитарной линий, что имеет значение для диагностики лейкозов из этих линий. Активность фермента высокая при миелобластном лейкозе, низкая – при миеломонобластном и при монобластном лейкозе может не обнаруживаться вовсе.
Кислая фосфатаза
Активность кислой фосфатазы (КФ) определяется процессами клеточной дифференцировки. По мере созревания клеток ее активность снижается, в зрелых клетках активность КФ не определяется. Бластные клетки (миелобласты, монобласты), окрашенные в зеленый цвет, содержат в цитоплазме мелкую красную зернистость – положительная реакция.
Положительная реакция на кислую фосфатазу отмечается при остром миелобластном лейкозе, резко положительная реакция – при остром монобластном лейкозе.
Реакция на кислые мукополисахариды.КМПС
Зернистость клеток гранулоцитарного ряда содержит кислые мукополисахариды, основным компонентом которых является хондроитин-4-сульфат.
Наибольшее количество кислых мукополисахаридов синтезируется в промиелоцитах, поэтому реакция специфична дляострого промиелоцитарного лейкоза.
3.Иммунологическое исследование
иммунофенотипирование – один из иммунологических методов дифференциации клеток периферической крови, костного мозга, лимфатических узлов и других органов и тканей. Метод основан на реакции «антиген–антитело», в результате которой по наличию определенного набора клеточных маркеров – кластеров дифференцировки (cluster of differentiation antigens, CD) на поверхности или внутри клетки определяют вид и функциональное состояние клетки.
Метод иммунофенотипирования включает: проточную флюориметрию и иммуногистохимию. Метод проточной флюориметрии используют для иммунофенотипирования лейкоцитов периферической крови и ядросодержащих клеток костного мозга. Метод иммуногистохимии – для типирование клеток в гистологических препаратах.
4.Цитогенетическое
При использовании цитогенетических методов можно определитьразнообразные мутации хромосом, такие как транслокация – обмен участками негомологичных хромосом; инверсия – поворот отдельных участков хромосомы на 180°; инсерция – вставка в каком-либо участке хромосомы нуклеотидной последовательности; делеция – утрата концевого участка хромосомы (терминальная) и внутреннего участка хромосомы (интеркалярная); появление дополнительных хромосом и др.
5.Молекулярно-биологический