Мы уже говорили о полимеразной цепной реакции (ПЦР) как об одном из самых эффективных методов диагностики инфекционных заболеваний. Однако данная методика все еще недоступна во многих лабораториях и зачастую не может применяться в качестве экспресс-метода диагностики при необходимости в быстром получении результата. В таком случае возможно применение таких реакций как РСК, ИФА, РИФ, РПГА, РП, объединяемых под общим понятием серологических методов диагностики.
АГ + АТ
В широком смысле серология представляет из себя целую научную дисциплину, изучающую свойства сыворотки крови, однако в медицине этот термин употребляется чаще в иммунологическом плане с акцентом на содержащихся в сыворотке иммуноглобулинах - антителах. Исходя из этого, основой серологических реакций является образование комплекса антигена и антитела (АГ+ АТ) - положительная реакция, либо его отсутствие - отрицательная реакция. Для того, чтобы понять, образовался ли данный комплекс, к основным компонентам реакции добавляют некие метки, которые и придают реакции специфичность и соответствующее название.
Все серологические реакции можно разделить на три больших группы, отличающихся по используемым компонентам и конечной цели - сероиндикация, сероидентификация и серодиагностика. Целью сероиндикации является обнаружение антигена (а значит возбудителя заболевания) в исследуемом материале, которым может быть кровь, рвотные и каловые массы, моча, слюна, ликвор - по сути любой биологический материал. Для того, чтобы обнаружить инфекционного агента, используются специальные диагностические сыворотки, заранее содержащие необходимые антитела для построения комплекса АГ + АТ. Такие реакции часто носят лишь качественный характер и позволяют определить наличие возбудителя в целом, чтобы понять, следует ли проводить дальнейший диагностический поиск.
В случае положительной реакции сероиндикации необходимо провести посев исследуемого материала на среду для того, чтобы увеличить количество возбудителя для его дальнейшего "узнавания", что и происходит в реакциях сероидентификации. На питательной среде происходит активное размножение инфекционного агента, и иногда даже внешний вид колонии уже может подсказать, какой перед лаборантом микроорганизм, но постановка серологических реакций все же необходима для объективизации данных. В инфекционной практике мало определить вид микроорганизма, поскольку почти у всех возбудителей имеются подвиды, отличающиеся по своим патогенным свойствам. Такое явление обусловливает необходимость четкой идентификации возбудителя в соответствии с конкретными антигенами. Используются все те же диагностические сыворотки с иммуноглобулинами, но в этот раз они более специфичны, что позволяет определить конкретный серотип микроорганизма.
Немного особняком стоят реакции серодиагностики, поскольку их целью является не обнаружение антигена в материале, а поиск антител. Иммуноглобулины в большем количестве представлены именно в крови, поэтому производится забор крови у пациента и изучение его сыворотки. Для обнаружения иммунного комплекса используются диагностикумы, содержащие заранее заготовленные антигены того или иного возбудителя. С помощью такой реакции можно определить даже вид иммуноглобулина, что очень важно для понимания продолжительности того или иного процесса. Так, Ig G являются маркером перенесенной инфекции, в то время как Ig M - острого заболевания.
Некоторые серологические реакции
Наверное, самой распространенной серологической реакцией является ИФА - иммуноферментный анализ. Смысл такой реакции заключается в том, что при образовании иммунного комплекса происходит активация фермента, заранее внесенного в среду вместе с одним из компонентов. В результате активации определенной биохимической реакции образуются продукты, которые можно зафиксировать тем или иным способом. Существует множество вариаций ИФА, но смысл всего остается плюс минус тем же. В качестве ферментов чаще всего используются пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза и D-галактозидаза.
Интересной по своему механизму является реакция связывания комплемента (РСК), в которой используются эритроциты барана и сыворотка крови кролика, при этом никуда не девается сыворотка пациента и диагностикум с необходимым АГ. Такая на первый взгляд каша из компонентов в умелых руках обладает диагностической ценностью. При наличии в крови пациента антител происходит образование комплексов АГ + АТ и связывание ими особых белков - комплемента, в результате чего последние не могут воздействовать на эритроциты барана, и они выпадают в осадок - реакция положительная. Если же иммунных комплексов не образуется, свободный комплемент связывается с эритроцитами, сенсибилизированными кроличьей сывороткой, и происходит разрушение эритроцитов (лизис) - реакция отрицательная. Таким образом, с помощью барана, кролика, человека и возбудителя заболевания можно узнать заражен ли человек данным микроорганизмом. Иммунология удивительна, не правда ли ?
Необычной является и непрямая реакция флюоресценции (нРИФ). В статье про антитела и антигены мы уже говорили о том, что нельзя утверждать, будто АГ - это все чужеродное, поскольку любая молекула (даже наша собственная может оказаться этим самым антигеном). На этом принципе и построена данная реакция, в результате которой образуются два иммунных комплекса - классический и комлпекс из антитела+ антитела к антителам. Да, сами антитела могут обладать антигенными свойствами и выступать в качестве антигенов в построении иммунных комплексов. Образуется большой трехслойный комплекс, состоящий из двух поменьше. Эта реакция интересна не только с точки зрения иммунологии, но и с философской стороны, доказывая дуальность всех вещей в этом мире и отрицая существование противоположностей. Одно исходит из другого, образуя некий круг без начала и конца, просто существующий и не обладающий теми свойствами, которыми наделяет его сознание человека.
