Что бы получить правильный результат на проточном цитометре необходимо корректно настроить прибор. Правильная настройка проточного цитометра всегда делается перед его использованием, и она включает проверку детекторов, стабильность флюидной системы и настройку компенсации.
Анализ выполняется и с целью максимальной стандартизации, детекции флуоресцентного и рассеянного сигналов, а также для оптимизации гидродинамической фокусировки.
Для настройки проточного цитометра и его контроля качества необходимо ежедневно перед использованием делать калибровку. Калибровка даёт автоматическое определение и отслеживания характеристик проточного цитометра, возможность составления каждый дневных отчетов его производительности.
Цель работы
Оценка динамического диапазона, чувствительности детекторов с использованием Attune Performance Tracking Beads Catalog Number 4449754.
Материал и методы
Одноразовые пробирки 12 × 75 мм, микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл, 2 мл или эквивалентные. Фосфатно-солевой буфер (PBS) от производителя BioSino или деионизированная вода в качестве разбавителя шариков (битов).
Результаты
Рисунок 1. Оценка динамического диапазона и чувствительности детекторов проводилась по результатам измерения стандартного образца микросфер с 4 пиками флуоресценции на каждом флуор детекторе с Attune Performance Tracking Beads Catalog Number 4449754 для достоверности и точности работы прибора.
На проточном цитофлуориметре 1 лазер, до 5 флуоресцентных каналов, 7S, BioSino стоят следующие детекторы:
- FL1: 525/50 нм (FITC/Alexa 488);
- FL2: 585/40 (PE);
- FL3:630/30 (PE-Texas Red/ECD/PI);
- FL4: 697/60 (PerCP /PE-Cy5 / PE-Cy5.5);
- FL5:780/60 (PE-Cy7).
Заключение
Диапазон детекторов в 7 декад (107), достаточный для любых задач. На практике оказалось, все 4 пика микросфер укладываются в первых 5 декад (105), т.е. динамический диапазон отличный, причем с запасом.
Чувствительность детектора это способность различать тусклые популяции, т.е. первые два пика в каждом канале. На всех детекторах пики различимы: для FL1-FL4 четко, для FL5 хуже.
Распоряжение пиков: а) обычное как для большинства проточных цитометров, б) возможность использовать log и ln экспоненциальных шкал в ПО вполне позволяет развести пики.
