Определение объема сердца
После иссечения объем сердца определялся методом погружения, описанным Scherle.15 Briefly, сердце иссекалось, препарировалось без мягких тканей, промывалось в соляном растворе и погружалось в стакан, опломбированный соляным раствором. Объем вытесненного раствора принимался за объем сердца, выраженный в мл.
Размер инфаркта
Размер инфаркта измерялся, как описано выше.13 В sum- mary, после обезвоживания и парафинирования, поперечные сечения желудочков толщиной 5 мкм были получены с помощью ротационного микротома (Reichert-Jung 2045 Multicut, Гейдельберг, Германия). Два гистологических слайда на одно животное, каждый из которых состоял из шести секций, были смонтированы и окрашены в красный цвет с помощью микросира ius-красного. Для получения изображений с разрешением 600 dpi использовался сканер (HP DeskJet F380, США). Получено 20 изображений на одну инфарктированную группу. Окружности эндокарда и эпикарда инфаркта и левого желудочка определяли с помощью программного обеспечения для анализа изображений (Image-Pro Plus 4.5; Media Cybernetics, Silver Spring, MD, USA). Определены следующие параметры: окружность рубца эндокарда (ЦНС); окружность рубца эпикарда (CEPS); окружность кумурузы левого желудочка (ENCLV); окружность эпикарда левого желудочка (EPCLV). Размер инфаркта выражался в процентах по следующей формуле: (CENS + CEPS/ENCLV + EPCLV) 100 и рассчитан как среднее значение 20 изображений на одну инфарктную группу.
Содержание коллагена
Содержание коллагена оценивали в двух разных областях левого желудочка (переходной и удаленной от инфаркта). Для этой цели использовались те же слайды, которые были установлены для оценки размера инфаркта. Для каждой области с помощью камеры SPOT Insight Color (Diagnostic Instruments, США), соединенной с поляризованным световым микроскопом (Olympus AX70®, Токио, Япония) на 10 объективах, было получено 20 изображений на каждую экспериментальную ментальную группу. Распределение общего содержания коллагена анализировалось с помощью программного обеспечения для анализа изображений Image Pro-Plus 4.5® (Media Cybernetics, Silver Spring, MD, США). В данном анализе случайным образом исследованы 12 микроскопических полей на область от шести крыс на группу. На каждое изображение была наложена 88-точечная сетка, и на каждую крысу было назначено в общей сложности 1056 точек на регион. Область была определена путем сложения этих точек, а затем деления результата на общие точки поперечного сечения. Результат выражается стандартной погрешностью.
Экспрессия гена плода
Экспрессия РНК альфа-миозина тяжелой цепи (a-MHC), þ-MHC и скелетного a-актина в ткани ЛЖ была определяется с использованием обратной транскрипции полимеразной цепной реакции.16 Программное обеспечение Primer 3 (http://frodo. wi.mit.edu/primer3/) использовалось для разработки последующих праймеров: a-MHC (смысл: 5J-CGA GTC CCA GGT CAA G-3J, antisense: 5J-AGG CTC TTT CTG GAC C-3J); þ-MHC (смысл: 5J-CAT CCC CAA TGA GAC GAA G-3J, antisense: 5J-AGG CTC)TTT CTG GAC A-3J); скелетный a-actin (смысл: 5J-ACC ACA)GGC ATT GTT CTG GA-3J, antisense: 5J-TAA GGT AGT CAGTGA GGT CC-3J); и циклофилин (смысл: 5J-AAT GCT GGA CCA ACA AA-3J, антисенс: 5J-CCT TCT TTC ACC TTC ACCCCA AA-3J). Генетическая экспрессия циклофилина служила нормализатором для получения относительной экспрессии генов.
Статистический анализ
Данные представлены как среднеквадратическая ошибка. Статистически значимым было признано р-значение <0,05. Данные были проверены на нормальность с помощью теста Шапиро-Вилка. Для сравнения групп использовался двусторонний анализ дисперсии с последующей коррекцией Бонферрони. Количество животных и изображения, использованные в каждом эксперименте, приведены в соответствующей таблице и легендах.
Результаты
Общие характеристики и тренировочная способность крыс-эксперименталов-импенталов приведены в таблице 1. В ходе тренировок применялось увеличение общей дистанции и снижение частоты сердечных сокращений в покое у инфарктовых крыс как само по себе, так и в сочетании с MSC, по сравнению с малоподвижным контролем. Однако эффект терапии МКС сам по себе не обнаружен. Кроме того, как MSC терапия, так и тренировки упражнений улучшили функцию LV у инфарктовых крыс, увеличивая фракцию выброса (ФВ) и фракционное укорачивание (ФУ), и этот эффект был сохранен, когда терапия была совмещена. Что касается размера инфаркта, MSC терапии и тренировки упражнений, как по отдельности, так и в сочетании, уменьшенный размер инфаркта, по сравнению с группой SC; MSC терапия была более эффективной.