3.5. Юглоне уменьшает сократительные реакции наведенные кофеином, кПа, иономицином и ПМа
Предварительная инкубация с джуглоном (30 мкм) значительно ингибировала сокращение, вызванное кофеином, по сравнению с контролем ( Рис.2). 6 а). Юглон также значительно подавлял сократительную реакцию, вызванную кПа, по сравнению с контролем ( Рис.2). 6 Б). Аналогично, предварительная инкубация с юглоном подавляла сокращение, вызванное иономицином (рис. 6 С). Блокатор кальциевых каналов L-типа Нифедипин (10 мкм) не оказал существенного влияния на вызванное иономицином сокращение ( Рис.2). 6 С). Сокращение, вызванное активатором протеинкиназы с рмА, было значительно уменьшено после предварительной инкубации с 30 мкм юглоном (Рис.2). 6 г).
4. Обсуждение
В этом исследовании мы исследовали влияние джуглона на ишемическую артерию свиньи ex-vivo. Juglone произвело большую, концентраци-зависимую релаксацию изолированных porcine участков коронарной артерии через оба эндотелий зависимых и независимых механизма. Для определения эндотелийзависимого механизма релаксации ткани инкубировали с L-NAME (ингибитором синтазы оксида азота), ODQ (ингибитором гуанилилциклазы) и индометацином (ингибитором циклооксигеназы для ингибирования продукции простациклина). Результаты показывают, что L- NAME ингибировал релаксацию к джуглону на такое же количество,как и при удалении эндотелия. Кроме того, ни предварительная обработка индометацином в одиночку, ни в комбинации с L-NAME не оказала никакого влияния на релаксацию джуглона. Эти данные указывают на то, что простациклин не участвует в реакции релаксации и что индометацин предотвращает ингибирующее действие L-NAME. Интересно, что комбинация индометацина и L-NAME не обладала ингибирующим действием на индуцированную юглоном вазодилатацию с точки зрения ингибирующего влияния только L-NAME на вазодилатацию юглона. Согласно с Кадекаро и др., (2000), индометацин может предотвратить некоторые из эффектов L-NAME (Kadekaro et al., 2000). Таким образом, существует вероятность того, что индометацин может индуцировать расцепление eNOS или может быть уменьшено связывание L-NAME с eNOS в кольцах PCA.
Азотоводородная окись регулирует сужение ровной мышцы через продукцию cGMP путем активировать никак-чувствительную гуанилиловую циклазу (NO-GC). Установлена практика использования специфических ингибиторов NO-GC, таких как ODQ, для оценки цГМФ-зависимых эффектов оксида азота ( Lies et al., 2013). Предварительная обработка ингибитором no-GC ODQ ( Lies et al., 2013) привело к ингибированию вазорелаксантного эффекта юглона. Эти данные указывают на то, что No/cGC/cGMP-путь опосредует эндотелийзависимую релаксацию в вазорелаксантном ответе, индуцированном юглоном.
Хотя была небольшая разница в релаксации к juglone в сосудах эндотелия неповрежденных pre-contracted с KCl, сравненном к U46619, эта разница значительно была увеличена в эндотелий-лишенных сосудах. Это говорит о том, что эндотелий-независимая релаксация к юглону предотвращается предварительным сокращением с KCl в обнаженных тканях. Для этого есть две потенциальные причины. Первый заключается в том, что присутствие высокого калия вне клетки предотвращает истечение K + через k + каналы, тем самым предотвращая a K + канал опосредовал реакцию релаксации. Однако предварительно инкубированный с неселективным блокатором к + каналов чай не оказал никакого влияния на релаксацию джуглона, исключив влияние на К + каналы. Напротив, Ahmad et al., (2019) сообщается об активности юглона в отношении калиевых каналов в аорте крысы. Возможно, что дифференциальная экспрессия калиевых каналов в ПКА по сравнению с аортой крысы означает, что ингибирующее действие юглона на калиевые каналы менее важно в ПКА. Альтернативная причина заключается в том, что U46619 и KCl вызывают сокращения через различные сигнальные пути. Мы предполагаем, что эндотелий-независимый механизм юглона приводит к ингибированию сигнального пути, индуцированного U46619, но не к сигналу, индуцированному KCl. Такой же эффект был отмечен и в предыдущих исследованиях (Pellanda et al., 2001 ; Hille, 1978). Общеизвестно, что KCl сокращает сосудистые гладкомышечные клетки за счет деполяризации. Деполяризация приводит к активации кальциевых каналов L-типа, что приводит к притоку внеклеточного кальция. Напротив, сокращения, вызванные U46619, являются опосредованными рецепторами. Было описано, что эти сокращения являются результатом не только притока внеклеточного кальция через кальциевые каналы L-типа, но и через кальциевые каналы не-L-типа, а также механизмов, независимых от внутриклеточного повышения кальция ( Tosun et al., 1998). Поэтому, данные предлагают что juglone могло подействовать через кальци-независимые механизмы. С другой стороны, предварительная инкубация с юглоном значительно уменьшила вызванные кальцием сокращения в кольцах PCA, указывая на то, что юглон может ингибировать приток кальция, или он ингибирует сокращение ниже по потоку кальция. Чтобы еще больше подтвердить роль кальциевых каналов, Bay K8644 ( агонист кальциевых каналов L-типа) (Rae and Calixto, 1989 ) был добавлен кумулятивно. Сократительная реакция на Bay K8644 была значительно нарушена в присутствии джуглона. L- NAME не оказало дальнейшего влияния на вызванное сокращением Bay K8644, указывая, что часть эффекта может быть опосредована через ингибирование притока кальция через NO-путь. Вместе взятые, эти данные указывают на то, что либо юглон ингибирует приток кальция через ингибирование вольт-зависимых кальциевых каналов, либо он ингибирует сократительный механизм ниже по потоку притока кальция.
