Цистозный эхинококкоз, вызванный Echinococcus granulosus sensu lato, представляет собой наиболее важный зооноз цестоды в Южной Европе из-за тяжелых экономических последствий в секторе общественного здравоохранения и животноводства. В Италии СЕ широко распространен среди сельскохозяйственных животных с местными и региональными различиями. CE имеет спорадическую диффузию в северной части с низкой распространенностью среди жвачных животных. В центральной Италии распространенность ХЭ среди овец составляла 22,0-47,0%, среди крупного рогатого скота - 7,3-15,3% и очень низкая у свиней - 0,8%. На юге Италии встречаются эндемические и гиперэндемичные зоны ЦО с высоким уровнем распространенности среди жвачных животных: 33,3-75,0% у овец, 10,4% у крупного рогатого скота и 10,5% у буйволов. Самая низкая распространенность инфекции наблюдается у лошадей. Сообщалось также, что СЕ встречался у свиней с распространенностью от 9,4 до 11,1%.
На сегодняшний день итальянский сценарий показывает несколько видов и генотипов, циркулирующих в разных домашних растениях-хозяевах. В прошлом часто сообщалось о генотипах E. granulosus sensu stricto G1, G2 и G3 у овец, крупного рогатого скота и буйволов. Однако недавнее исследование показало, что генотип G2 является микровариантом G3. Кроме того, в континентальной Италии генотип G4 описан у лошадей, G5 у крупного рогатого скота, а G7 - у свиней острова Сардау и других островов.
Материалы и методы
В общей сложности 2108 диких кабанов, добытых в 138 районах охоты на кабанов площадью 123 417 га из четырех различных провинций региона Кампания на юге Италии, были обследованы в 2016 и 2017 годах.
Размер выборки был рассчитан по данным Thrusfield для теоретически "бесконечной" популяции с учетом следующих эпидемиологических данных: ожидаемая распространенность 3,7% для ХЭ у кабанов по результатам аналогичного исследования, проведенного на Сардинии; доверительный интервал (99%) и желаемая абсолютная точность (1%).
В рамках регионального проекта "Пианино Emergenza Cinghiali in Campania - PECC 2016-2019" 51 ветеринар, специализирующийся на осмотре мясных туш кабанов, был привлечен к изучению туш диких свиней в поле. Для каждого кабана заполнялась подробная форма, в которой указывались площадь охоты, пол и возраст. Возраст кабана оценивался при обследовании зубов по Массею и Тосо. Органы диких кабанов в течение 24 часов перевозились и тщательно осматривались на факультете ветеринарной медицины и животноводства на наличие кист цианидов путем визуального осмотра, пальпации и последовательных разрезов органов. Для определения количества, местоположения, морфотипа и жизнеспособности кисты были изучены паразитирующие органы. Кисты классифицировались морфологически как плодородные, стерильные, кальцинированные и кальцинированные.
Рождаемость оценивали с помощью оптического микроскопа, который наблюдал жизнеспособность и подвижность протосколов, а также движения пламенных клеток без окрашивания по данным Varcasia et al. Массовую инфекцию определяли, когда у одного животного было обнаружено более десяти кист.
Каждая киста была вскрыта, а зародышевый слой и кистозная жидкость гидатида были собраны и сохранены при температуре -20 °C для последующего молекулярного анализа, проведенного кафедрой ветеринарной медицины. ДНК была извлечена с помощью NucleoSpin Tissue. Штаммы/генотипы эхинококков были идентифицированы с помощью полимеразной цепной реакции и секвенирования ДНК.
Первый скрининг кист проводился методом ПЦР/семинарной ПЦР с четырьмя различными реакциями ПЦР для того, чтобы отличить кластер генотипов G1/G3 от генотипов G5 и G6/7. Секвенирование митохондриальных генов ND4, ATP6, ND2 и ИСП, описанных в работе Nakao et al., проводилось на тех же образцах.
Во-первых, праймеры F:COI использовались для амплификации фрагмента приблизительно 800 bp, соответствующего частичному гену COI, а праймеры F:ND4 и R:ND2 были использованы для амплификации фрагмента приблизительно в 1600 bp, соответствующего гену ATP6 и его фланговой области. Продукты ПЦР очищались с помощью Nucleospin Gel и PCR Clean Up и отправлялись во внешнюю службу секвенирования. Полученные последовательности сравнивались с последовательностями в базе данных НЦБИ с помощью BLAST. Статистический анализ проводился с использованием Epi Info v3.5.3. Тест хи-квадрат использовался для оценки различий между инфекциями в легких и печени, а также между показателями инфицирования по возрасту и полу. Для оценки вероятности влияния возраста и пола на уровень инфицирования были рассчитаны коэффициенты вероятности. Значение P < 0,05 было признано значительным.
Распределение охотничьих угодий было получено с помощью ArcGIS и связано с административными границами провинций, региональных парков и национальных парков.
Для каждой области был рассчитан коэффициент позитивности и разделен на семь классов с процентным соотношением от 0 до 100.
Результаты
Общая распространенность СЕ составила 4,4% (93/2108; CI 95% 3,5-5,3) из 2108 обследованных диких кабанов. Распространенность ХЭ в охотничий сезон 2016 г. составила 4,6% (46/997) и 4,2% (47/1111) в 2017 г. (χ2 = 0,28; P = 0,5983).
В общей сложности было обнаружено 123 гидатида. Обилие составляло 0,06, а средняя интенсивность - 1,3 (диапазон 1-13). Кистозный эхинококкоз был обнаружен в 0,05% (1/2108) селезенок, в 0,1% (3/2108) легких, в 4,2% (89/2108) обследованных печенях (χ2 = 165,26; P <0,0001; DF = 2). Из общего числа обнаруженных гидатидов 0,8% находились в селезенках (1/123), 3,3% в легких (4/123) и 95,9% в печени.
Кисты гидатиды были плодородны на 56.9% (70/123) и стерильны на 43.1% (53/123) (χ2 = 4.699; P = 0.030), тогда как случайных/кальцинированных кист не обнаружено. В частности, фертильность 75,0% наблюдалась в легких (3/4) и 56,8% в печени (67/118), тогда как единственная обнаруженная в селезенке гидатида была стерильной.
Плодородные кисты были обнаружены у 19,4% инфицированных кабанов (18/93). Коэффициент фертильности составил 0,9% (CI 95% 0,5-1,3).
Одиночное животное (1,1% инфицированных кабанов) из муниципалитета Сала Консилина заразилось 13 кистами гидатиды. Необычное расположение селезенки было обнаружено у дикого кабана из муниципалитета Валло делла Лукания. Смешанной инфекции у обследованных животных не обнаружено.
