Материалы и методы
Материалы
Экспериментальные животные состояли из шестнадцати самок белых новозеландских кроликов (Чарльз Ривер Канада, код штамма 052), взвешивания
2,5 кг каждый. По данным информационного листа поставщика, кроликам в среднем было 11 недель. Кролики помещались в аккредитованную лабораторию по исследованию животных под ветеринарным контролем и получали автоклавируемый рацион кроликов с содержанием селена 0,48 мг/кг. Биореагент селена натрия (Сигма-Альдрих) растворяли в воде при содержании 1 ч. на миллион для пищевой эластичности. Трастузумаб (Roche/Genentech) вводили подкожно, чтобы снизить риск вреда от внутривенного введения e, а именно: объемная перегрузка, флебит и необходимость в длительной анестезии.
Экспериментальные группы
Кролики были приписаны к одной из четырех экспериментальных групп, как показано на рис. 1. Группы 1, 2 и 4 получали оральную водопроводную воду ad libi- tum, а группа 3 - оральную селеновую воду ad libitum в течение одной недели. Животные размещались в общежитиях, предварительно точно измеряя забор воды, дополненной селеном, отдельным кроликом. После завершения недельного прогона селена или водопроводной воды животные в группах 1е3 получали загрузочную дозу трастузумаба, 8 мг/кг подкожно. Еженедельно в течение трех дополнительных недель после этого группы 2 и 3 получали 6 мг/кг трастузумаба подкожно.
Определение селена
Уровень селена в сыворотке крови измерялся до приема добавки селената (или водопроводной воды плацебо) и после приема первой подкожной медикаментозной дозы для групп 1e3. Ткани левого желудочка собирали для определения уровня селена в тканях при некропсии для групп 1e4. Измерения селена в сыворотке крови и тканях проводились в аттестованной ветеринарной клинической лаборатории Мичиганского государственного университета.
Жертвы и образцы тканей
Ветеринары эвтаназировали кроликов, вводя в ушные вены пентобарбитал (>75 мг/кг). Смерть наступила из-за отсутствия сердцебиения и роговичного ритма. Животных помещали в ледяной холодильник сразу же после эвтаназии - ели до тех пор, пока не была проведена некропсия. Ткани сердца были помещены в консервант сразу после некропсии. Интервал послесмертного отбора проб не был строго контролируемым.
Гистопатология
Для гистопатологии получены сечения правого и левого желудочков для кроликов в группах 1e3. Подготовка и интерпретация ткани выполнялась в клинической ветеринарной лаборатории аттестованными техниками и ветеринарным патологоанатомом. Интерпретирующий патологоанатом был ослеплен экспериментальными группами для образцов. Все образцы были оценены на интерстициальную экспансию, миоинформационную дегенерацию, воспалительные инфильтраты, а также апоптоз / некроз.
Трансмиссионная электронная микроскопия
Трансмиссионная электронная микроскопия (ТЭМ) была выполнена в научно-исследовательской лаборатории визуализации дипломированными техниками. Сечения сердечной ткани были получены при некропсии. После первичного оптического волокна образцы промывали буфером из какодилата размером 0,1 М и после оптического волокна - тетроксидом осмия размером 1% в буфере из какодилата размером 0,1 М, обезвоживали в градиентном ряду ацетона, а также встраивали и встраивали в Spurr. Тонкие участки толщиной 70 нм были получены с помощью Power Tome Ultramicrotome (RMC, Boeckeler Instruments, Tucson, AZ) и окрашены постом с цитратом уранилацетата и свинца. Изображения были получены с помощью трансмиссионного электронного микроскопа JEOL 100CX (Японская электронно-оптическая лаборатория, Япония) при ускоряющем напряжении 100 кВ.
Слепые рецензенты интерпретировали изображения каждого кролика при 8000 намагничиваниях по стандартизированному протоколу для определения (1) количества митохондрий на одно поле, (2) объема митохондрий в том же самом изображении (в квадрате микрон) и (3) внутренней или ганизационной ганизации митохондрий. На основе измерений в(1) и (2) был рассчитан средний объем митохондрий на одно поле.
продолжение следует...