Терапия стволовыми клетками
MSCs, собранные из бедренного костного мозга пяти самцов крыс Вистар (возраст шесть недель) были выделены, расширены и сохранены в культуре, и характеризуются стекающей цитометрии на тип клетки, как описано выше.13 Аликвоты из 1 106 клеток были приготовлены в 1,0 мл фосфатно-буферного солевого раствора (PBS) и введены через хвостовую вену сразу же после МИ. Животным, не обработанным MSC (группы SC и EX), вводилась только та же доза PBS.
Для выявления пересаженных МСЦ у крыс, 5 дополнительным животным вводили ту же самую дозу МСЦ, маркированную с помощью набора для маркировки клеток Qtracker® 655 (Invitrogen) в соответствии с рекомендациями производителя. Эти животные были эвтаназированы через 18 часов после МИ и фрагменты сердца, селезенки и легкого были гистологически проанализированы, как описано выше.13 Металлические стволовые клетки были обнаружены в легочной ткани пяти инфарктовых животных, однако никаких признаков меченых стволовых клеток не было обнаружено в сердце и селезенке этих животных.
Протоколы тренировок и максимальной скорости работы
Животные из групп EX и EXMSC прошли 12-недельную тренировку на беговой дорожке. За неделю до MI все животные были адаптированы к беговой дорожке, работая 5 мин/день, 5 м/мин, в течение пяти дней. Занятия по подготовке к беговой дорожке были начаты через 24 часа после MI. В течение первой недели крысы в группах EX и EXMSC бегали 10 мин/день, 0 % класс, со скоростью 7-10 м/мин, а продолжительность тренировки прогрессировала от 10 до 50 мин. Для определения максимальной скорости бега, с помощью которой можно контролировать скорость бега во время следующих тренировок, в начале второй недели каждое животное в группах EX и EXMSC
Проходило испытание на беговой дорожке с прогрессирующим движением, пока не появилась усталость, как это было описано ранее.13 Затем, начиная со второй недели, скорость бега тренировок по упражнениям была установлена на уровне 60% от средней максимальной скорости бега, полученной для каждой группы, а продолжительность занятий была установлена на уровне 60 мин для обеих групп. Постепенный тест на беговой дорожке был повторен в конце четвертой и восьмой недель, чтобы скорректировать скорость бега каждой группы, а в конце двенадцатой недели - для оценки способности всех экспериментальных ани-малов к выполнению упражнений. Средняя дистанция, пройденная каждой группой, была принята в качестве индекса тренировочной способности. Все тесты прогрессивной беговой дорожки выполнялись через 24 часа после окончания последнего тренировочного занятия в отработанных группах.
Эхокардиографические и электрокардиографические измерения
В конце эксперимента, через 24 часа после проведения последнего теста на беговой дорожке, были проведены эхокардиографические и электрокардиографические мероприятия, как описано выше.13,14 Животные анестезировали в индукционной камере, промытой 1-1,5% изофлураном и 100% кислородом при постоянной подаче 1 л/мин. После потери сознания их помещали на платформу в дорсальном углу с оплетением четырех конечностей. Изофлуран поддерживался в достаточно высокой концентрации, чтобы сдерживать (0.5-1.0%), и животные могли поддерживать спонтанное дыхание. Эти низкие концентрации изофлурана были применены для иммобилизации животного только в течение короткого периода времени для обследований и, как известно, не оказывают значительного влияния на сердечную деятельность.
Эхокардиографические исследования включали в себя двухмерные шпильки с быстрой частотой дискретизации 120 кадров в секунду и M-режимом, с использованием системы MyLabTM 30 (Esaote, Генуя, Италия) и датчиков с фазированной решеткой с номинальной частотой 11,0 МГц. Двухмерные и М-модовые трансторакальные эхокардиограммы были получены со скоростью развертки 200 мм/с и адаптированы к частоте сердечных сокращений в соответствии с рекомендациями Американского общества эхокардиографии и сохранены для последующего анализа. Каждый параметр измерялся в трех различных сердечных циклах, а среднее значение измерений использовалось для статического анализа. Записи M-режима анализировались слепым наблюдателем с помощью автономной системы анализа, доступной на самом приборе.
Для получения электрокардиограммы свинец II записывался с помощью системы сбора данных PowerLab (ADInstruments, Сан-Паулу, Бразилия), а данные анализировались с помощью LabChart Pro (ADInstruments LabChart 7, Сан-Паулу, Бразилия). Все mea- уверенности были получены и проанализированы опытным специалистом, ослепленным исследуемыми группами и процедурами.
Эвтаназия и отбор проб
Двадцать четыре часа после эхокардиографических и электрокардиографических исследований, и 12 недель плюс три дня после МИ, масса тела была измерена и животное было эвтаназировано путем углубления анестезии. После торакотомии, сердце было введено с хлористым калием (14 мМ) и вырезали. После измерения массы и объема сердца предсердия рассекали, а желудочки разрезали поперечно на три миллиметровых кольца (основное, промежуточное и верхушечное), из которых промежуточное кольцо обрабатывали для гистологической обработки.