Сосудистая деменция характеризуется потерей когнитивной функции в результате церебрально-сосудистых заболеваний и кардиоваскулярных патологических изменений, а ее основным проявлением является нарушение обучаемости и памяти. ВД является причиной, по меньшей мере, 20% случаев слабоумия. Недавние клинико-патологические исследования высветили роль цереброваскулярных заболеваний не только как основной причины когнитивных нарушений, но и как вспомогательного средства для проявления слабоумия, вызванного другими факторами, включая болезнь Альцгеймера и другие нейродегенеративные патологии. После БА ВД, как сообщается, является второй по распространенности причиной слабоумия среди пожилых людей. В то же время новые экспериментальные данные выявили ранее не признанную функциональную и патогенную синергию между нейронами, глией и сосудистыми клетками, создав новую основу для переоценки того, как изменения в сосудах головного мозга могут способствовать развитию нейронной дисфункции, лежащей в основе когнитивных нарушений. Срочно необходимы дальнейшие исследования, чтобы найти эффективные лекарства для лечения ВД. окклюзия двусторонней общей сонной артерии является общепризнанным методом у крыс.
Материалы и методы
1. Животные и лечение
Крыс обезболивали хлоральгивающим гидратом. Животные были случайно разделены на 4 группы: крысы, оперируемые фиктивными методами, получали одну и ту же операцию без окклюзии двойной перевязки, обе сонные артерии были осторожно отделены от блуждающего нерва, а постоянная окклюзия артерии была выполнена шелковой нитью. Для проверки крыс в группе ВД были случайным образом разделены на контрольную группу ВД, обработанную PBS, и 40 мг/кг ReA + ВД и 80 мг/кг ReA + ВД.
2. (4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий-бромистый (МТТ) анализ
Культурная среда была полностью удалена и раствор MTT был добавлен в свободную от фенола среду роста в соответствии с инструкциями производителя. Темно-синие кристаллы формазана растворялись в диметилсульфоксиде.
3. Анализ проточной цитометрии
Клетки, стимулируемые перекисью водорода с ReA или без него в течение 24 ч, затем их собирали в PBS. Все камеры инкубировали аннексином V-Флуоресцеина изотиоцианата и пропидия йодида в течение 15 минут при комнатной температуре в фотолаборатории. Вкрапленные клетки анализировали с помощью проточной цитометрии.
4. DCF анализы
Мониторинг внутриклеточной УОС проводился с помощью чувствительного к пероксидам флуоресцентного зонда 2',7' -дихлорцетат-диакетата в соответствии с инструкциями производителя. Клетки культивировали в 6-луночных пластинах в течение 24 ч, а затем обрабатывали клетки 400 мкМ H2O2 в течение 24 ч в присутствии или отсутствии РеА.
5. Испытание водяного лабиринта Морриса (MWM)
После лечения наркозависимости крыс обучали и тестировали в ежедневном тесте MWM в течение 5 дней. Устройство MWM состоит из круглого бассейна, расположенного в помещении с заметными символами на стене бассейна. Бассейн был 150 см в диаметре, глубиной 60 см, заполнен водой до высоты 40 см для укрытия платформы. Платформа и внутренняя поверхность устройства были окрашены в черный цвет, чтобы предотвратить видимость платформы, которая была погружена примерно на 1,5 см ниже поверхности воды и оставалась в середине второго квадранта. Каждое испытание продолжалось до тех пор, пока тестируемая крыса не обнаружила скрытую эвакуационную платформу в течение 120 с или менее. Если не удалось, крыса направлялась экспериментатором на скрытую платформу в течение 2 с. Задержка побега была записана в качестве оценки пространственной памяти. После последнего исследования было проведено исследование зонда для оценки пространственной памяти. Платформа была удалена из воды, и каждой крысе было разрешено свободно плавать в течение 60 с.
6. Электрофизиологические записи
После теста MWM каждую крысу осторожно помещали в стереотаксический аппарат головы после анестезии 30% уретаном. Для вставки электродов стимуляции и записи электродов череп крысы был просверлен круглым окном черепа с помощью хирургического пинцета. Тест один стимулы были доставлены в регион CA3, которые вызвали ответ 50% от своего максимального диапазона от 0.1 до 1.0 мА.
Влияние Рехманиозида А на когнитивные нарушения у крыс с ВДР
Существенных гистологических изменений печени, сердца, легких и селезенки, изолированных от крыс не наблюдалось. Кроме того, существенных различий в уровнях АСТ и АЛТ в сыворотке крови не наблюдалось. ReA безопасна для применения. Далее, устройства MWM были использованы для измерения обучающих функций и функций памяти ReA лечения. Было предположено, что крысы в группе ВД показали более высокое время задержки, чем мнимое время группы с 1-го по 4-й день. А лечение ReA сократило время ожидания побега, частично восстанавливая функции памяти и обучения у крыс с ВД. Аналогичные результаты наблюдались и на 5-й день. Склон возбуждающего поля постсинаптического потенциала был значительно уменьшен в группе ВД по сравнению с группой Шам.
