Применение переноса криоконсервированных эмбрионов (FET) постепенно увеличилось в течение последних двух десятилетий благодаря достижениям в плане эффективности и безопасности криоконсервации. Витрификация заменила метод медленного замораживания в результате повышения выживаемости и более высокой частоты имплантации. Хотя сегодня перенос криоконсервированных эмбрионов широко используется в ВРТ, в последнее время возникли некоторые опасения по поводу его применения и безопасности с точки зрения течения беременности, акушерских и перинатальных исходов. Настоящее исследование направлено на изучение того, влияет ли перенос одного витрифицированного эмбриона 3-го дня с потерей бластомеров на беременность, частоту живорождения и акушерский исход.
Материалы и методы
Дизайн исследования: ретроспективное одноцентровое когортное исследование, включающее витрифицированные-размороженные эмбрионы 3-го дня, которые были перенесены в период с 2011 по 2018 год в Centre for Reproductive Medicine, Universitair Ziekenhuis Brussel, Belgium (Бельгия), полученные в результате процедуры ЭКО или ЭКО+ИКСИ. Каждая женщина была включена в анализ только один раз.
Из исследования были исключены пациенты:
· с IVM (созревание ооцитов invito)
· c использованием донорских ооцитов
· с ПГТ-А.
Эмбрионы были разделены на две группы:
· группу А. (интактный эмбрион после разморозки)
· группа Б (эмбрион с потерей бластомеров после разморозки).
Интактный эмбрион определяли как эмбрион, оставшийся полностью интактным после разморозки, без потери бластомеров. Эмбрион с потерей бластомеров определялся как эмбрион, потерявший один или несколько бластомеров после разморозки (но не менее 50% бластомеров интактны).
Использовался короткий протокол стимуляции с антагонистами. Мониторинг цикла осуществлялся с помощью оценки эстрадиола (E2), прогестерона (P) и лютеинизирующего гормона (LH) в сыворотке, а также серийных трансвагинальных ультразвуковых исследований.
Протокол подготовки к переносу криоконсервированного эмбриона:
- с использованием заместительной гормональной терапии (ЗГТ). Использовался эстрадиола валерат 6 мг в день с 1 или 2 дня менструального цикла и далее. Эмбриотрансфер планировали на пятый день приема прогестерона (Утрожестан, по 400 мг 2 раза в сутки).
- в естественном цикле со спонтанной или триггерной овуляцией. Криоперенос при спонтанной овуляции не требовал каких-либо фармакологических вмешательств. Серийный анализ крови для гормонального исследования и ультразвуковой мониторинг во время пролиферативной фазы проводились исключительно для выявления присутствия доминантного фолликула, а также пика ЛГ, чтобы запланировать перенос, когда эндометрий был синхронизирован со стадией развития эмбриона. Перенос эмбриона планировали на 5-й день от пика ЛГ. Либо при достижении доминатнтного фолликула 16 мм вводили 5000 МЕ ХГЧ. Эмбрионы размораживали за 1 день до переноса, культивировали в течение ночи и переносили на шестой день после введения ХГЧ.
Отбор эмбрионов перед витрификацией и метод витрификации:
На 3-й день утром были отобраны эмбрионы, состоящие не менее чем из 6 клеток и фрагментацией ≤20%. Метод криоконсервации представлял собой закрытую витрификацию с использованием соломинок CBS-VIT High-Security (Cryo Bio System, L'Aigle, France) с использованием ДМСО-этиленгликоля (ЭГ)-сахарозы (S) в качестве криопротекторов. (Набор Irvine ScientificR Freeze, Ньютаунмаунткеннеди, графство Уиклоу, Ирландия). Устройство и среда для витрификации не менялись в течение периода исследования; не изменился и протокол витрификации на 3-й день.
Оценка потери клеток после разморозки и оценка качества при переносе
Эмбрионы 3-го дня размораживали за 1 день до переноса и переносили как эмбрионы 4-го дня развития. Количество выживших клеток указывалось от общего количество клеток, которые были видны при оценке сразу после разморозки (например, 5/8 или 8/8). Если планировалась единственный криоперенос, один эмбрион (лучший по качеству при замораживании) помещали в культуру для ночного дробления при выживании не менее 50% клеток. Если было повреждено более 2 клеток и были доступны другие эмбрионы, размораживали второй эмбрион, поскольку известно, что дальнейшее дробление более вероятно у эмбрионов без повреждений или с минимальными повреждениями. На 4-й день оценивали дальнейшее дробление, которое можно было принять во внимание для определения окончательного качества эмбриона при переносе. Качество эмбриона при переносе было разделено на 4 категории в зависимости от степени дальнейшего дробления и конечной стадии клетки.
Эмбрионы качества 1 -эмбрионы компактизовались после ночного дробления или даже достигли стадии бластоцисты;
Эмбрионы качества 2 имели > 8 клеток и, по крайней мере 2 бластомера с дальнейшим дроблением.
Эмбрион качества 3 имели не менее 8 клеток и дробление 1 бластомера.
Эмбрионы качества 4 имели < 8 бластомеров и/или не имели признаков дальнейшего дробления. Дополнительное размораживание эмбриона на 4-й день никогда не проводилось во избежания эмбрио-эндометриальной асинхронии. Вспомогательный хэтчинг после разморозки не проводился.
Основные показатели результатов Основная цель этого ретроспективного когортного исследования состояла в том, чтобы оценить возможную связь между потерей клеток после разморозки и частотой живорождения. Вторичной конечной точкой была оценка потенциальной связи между потерей эмбриональных клеток после разморозки и неонатальными измерениями (длина тела, вес и окружность головы при рождении).
Возраст матери при криоконсервации и при переносе, причина бесплодия, процедура оплодотворения (ИКСИ/ЭКО) были сопоставимы между двумя группами.
Всего в анализ было включено 2327 3-х суточных витрифицированных/размороженных эмбрионов, из которых 1953 (83,9%) эмбриона были полностью интактными после разморозки (группа А) и 374 (16,1%) эмбриона с потерей клеток (группа В). Большинство эмбрионов содержало 8 клеток и/или более 8 клеток на момент витрификации (897, 38,4%, и 1027, 44,3% соответственно). Что касается качества эмбрионов при переносе, определяемого количеством клеток, которые далее делятся после разморозки и конечной клеточной стадии при переносе, всего 2071 (89,0%) эмбрионов имели качество 1 и 2 (1558 и 513 соответственно). Что касается качества эмбрионов на эмбриотрансфер, процент эмбрионов, представленных в каждом классе качества, существенно не отличался между двумя группами (класс 1 = 67,7% против 64,2, класс 2 = 21,8% против 23,2%, класс 3 = 3,7). % против 7,6%, класс 4 = 6,8% против 5% соответственно, p = 0,198) (табл. 3). Только в небольшом количестве переносов эмбрионы переносились без дальнейшего дробления.
Акушерские исходы
Частота наступления беременности и частота живорождения за цикл разморозки были значительно выше в группе интактных эмбрионов по сравнению с группой с потерей клеток (585/1953, 30%, по сравнению с 91/374, 24,3%, p = 0,028, и 267/1953, 13,7%, по сравнению с 35/374, 9,4%, p = 0,023).
Однако частота живорождения на положительный ХГЧ была эквивалентена между группами A и B (45,6% против 38,5%, p = 0,2).
Частота биохимических беременностей при переносе криоконсервированных эмбрионов (4,2% против 2,7%, p = 0,115) и частота выкидышей (5,3% против 6,9%, p = 0,252) были одинаковыми в группах с потерей бластомера и без нее, соответственно.
Измерения новорожденного (длина тела, вес и окружность головы при рождении) не показали статистической разницы между двумя группами. (50,1 ± 2,7 см против 50,1 ± 2,8 см, р = 0,918; 3334,7 ± 643,7 г против 3362,4 ± 517,7 г, р = 0,774; 38,2 ± 37,2 см против 34,5 ± 35,2 см, р = 0,169 соответственно для интактных и поврежденных зародышей).
Многопараметрический логистический регрессионный анализ не показал связи между переносом интактных или поврежденных эмбрионов и частоты живорождения (скорректированное ОШ = 1,4, 95% ДИ = 0,86–2,2, p = 0,18) при поправке на потенциальные факторы, такие как возраст пациента на момент криоконсервации.
