Вопрос имеет практическое значение для фармацевтики, молекулярной диагностики и аналитики: следовая бионагрузка способна вызывать артефакты (например, в ПЦР) или нарушать стерильность.
Дистилляция снижает, но не элиминирует бионагрузку
Кипячение инактивирует вегетативные формы, но споры Bacillus и Geobacillus устойчивы. При однократной дистилляции они могут переноситься в конденсат с паром.
В исследовании J. Pharm. Biomed. Anal. (2021) у 23 % проб самодельного дистиллята зафиксирована бионагрузка 1–10 КОЕ/100 мл после 7-дневной инкубации.
Олиготрофы: рост при почти нулевом питании
Methylobacterium, Sphingomonas, Pseudomonas vesicularis относятся к олиготрофам – способны поддерживать жизнедеятельность при содержании органики <0,1 мг/л. В дистилляте клетки часто переходят в VBNC-состояние (viable but non-culturable): метаболизм сохраняется (подтверждается CTC- или LIVE/DEAD-окрашиванием), но на стандартных средах роста нет.
Методика определяет результат
ГОСТ 31873–2012 требует для воды с низкой бионагрузкой:
💧фильтрацию 100 мл через мембрану 0,45 мкм,
💧инкубацию на R2A-агаре при 28 °C 5–7 суток.
При использовании МПА и 24-часовой инкубации доля выявленных олиготрофов падает с 68 % до 11 %.
Альтернативные методы:
💧проточная цитометрия,
💧qPCR по 16S рРНК (LOD — 10 клеток/мл).
Нормативы: «очищенная» ≠ «стерильная»
- «Очищенная вода» — это вода, прошедшая очистку от примесей (солей, органики, частиц), но не обязательно свободная от микроорганизмов.
Например, по Государственной фармакопее допускается до 100 живых бактерий в 1 мл — при условии, что это не патогены и нет эндотоксинов выше нормы. Такую воду можно использовать для приготовления растворов, промывки стекла, но не для инъекций. - «Стерильная вода» (например, «вода для инъекций») — это вода, в которой не обнаружено жизнеспособных микроорганизмов по строгой фармакопейной методике:
— пробу выдерживают 14 дней на двух питательных средах,
— при двух температурах (обычно 20–25 °C и 30–35 °C),
— в специально валидированных условиях.
Плюс — строгий контроль пирогенов (эндотоксинов ≤ 0,25 МЕ/мл по LAL-тесту).
Простая дистилляция или бытовой фильтр не обеспечивают стерильности — только комплексный, валидированный процесс (дистилляция + ультрафильтрация + контроль распределительной системы) даёт такой результат.
Вывод от ПрофЛаб
Жизнеспособные микроорганизмы в дистилляте – не гипотеза, а подтверждённый факт, зафиксированный в научной литературе и нормативных исследованиях. Их присутствие не всегда ведёт к риску, но требует соответствующего подхода к контролю: выбора чувствительных методик, удлинённых сроков инкубации и учёта физиологического состояния клеток (VBNC).
Безопасность определяется не способом получения воды, а системой её мониторинга, основанной на валидированных аналитических процедурах и метрологически обеспеченные измерениях.
Оставайтесь на связи с ПрофЛаб!
Наш сайт: профлаб.рф