Сегодня поговорим о том, можно ли что-то делать с незрелыми ооцитами, какие есть перспективы, для кого это может быть полезно.
Вступление:
В ходе проведения гормональной стимуляции не всегда фолликулы растут синхронно, т.е. имеют одинаковый размер. Это может быть связано с ответом на гормональную стимуляцию вследствие различного кровоснабжения или рецепторной активности. Как результат, разные по диаметру фолликулы на этапе завершения стимуляции.
Правила назначения триггера разнятся в клиниках, но чаще всего - это 3 и более фолликула размерами более 17 мм. Поэтому часть клеток мы получаем из фолликулов размерами больше или равно 12-14 мм. Забор клеток производится через 34-36 часов после введения триггер - ХГЧ или аГнРГ.
15-20% клеток, получаемых на пункции, относятся к незрелых клетками М1 и клеткам на стадии GV - зародышевых пузырьков. Продление культивирования таких клеток с целью их дозреванря, могло бы увеличить количество зрелых клеток и, как следствие, количество эмбрионов.
Однако, известно, что даже дозревшие М1/GV имеют сниженные показатели оплодотворения и невысокое качество эмбрионов.
Помимо этого фактора встаёт вопрос о плоидности таких эмбрионов. Достоверных исследований на эту тему пока нет.
Чтобы пролить свет на данный вопрос, есть ли в этом смысл для какой-то определённой когорты пациентов провели данное исследование.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ:
Исследование проводили в клинике ЭКО, Абу Даби, ОАЭ, с 01.2019 по 06.2021.
Включены пары, у которых в день пункции была получена хотя бы 1 незрелая клетка. MII оплодотворялись ЭКО или ИКСи, незрелые оставляли на ночь и оплодотворяли на следующий день, клетки после денудации культвировали 20-28 часов.
Также включены были циклы, которые предполагали проведение ПГТ-А.
Цель - оценить эуплоидность эмбрионов из зрелых ооцитов и дозревающих, и сопоставить зависимость от возраста, ИМТ, АМГ, спермограммы.
СТИМУЛЯЦИЯ СУПЕРОВУЛЯЦИИ:
Стандартные протоколы с антГнРГ или аГнРг, рФсг или ЧМГ. Триггер 5000-10000 ме хгч, 0.3мг аГнРГ, двойной триггер.
ОЦЕНКА ЗРЕЛОСТИ ООЦИТОВ:
Денудация клеток через 39 часов после триггера с использованием гиалуронидазы. MII собирались в отдельную лунку, МI и GV в другую.
Оценка созревания этих яйцеклеток проводилась после оценки оплодотвоенря зрелых клеток, т.е. 17-20 часов после икси.
Созревшие клетки подготавливались для ИКСи.
ПОДГОТОВКА СПЕРМЫ:
Сперма для оплодотвоерняи использовалась либо после мастурбации, либо после пункции яичек. Образцы оставляли на ночь для последующего оплодотвоерния дозревших ооцитов.
ОПЛОДОТВОРЕНИЕ И КУЛЬТИВИРОВАНИЕ:
Оплодотворение проводилось через 40 часов после триггера. После икси культивировались в отдельных каплях.
Эко проводилось через 39-41 час после триггера. Незрелые клетки на день оценки ополодотвоерения выбраковывались.
В данном центре метод ЭКО используется чаще в технике сплит.
Эмбрионы культивировались до 5-7 суток, с последующим проведением биопсии.
БИОПСИЯ ЭМБРИОНОВ:
Проводилась эмбрионам классом выше 3сс.
На биописию было взято от 5 до 8 клеток трофэктодермы.
Перенос эуплоидных эмбрионов, полученных из MII на 1 сутки.
Криоциклы проводились в ЕЦ или на ЗГТ. Клиническая беременность определялась как наличие плодного яйца через 4 недели после переноса, а продожающаяся беременость - наличие сердцебиения через 6 недель после переноса.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
390 пациентов
469 циклов эко
Средний возраст 36 лет.
Средний имт 28.
Средний амг 2.39
5449 ОКК
2911 зрелых клеток.
MI и GV оставляли дозревать, из них 910 дозрело.
Процент оплодотворения и процент утилизации бластоцист был выше для зрелых клеток, полученных в день пукнции.
Однако, не было выявлено значимой разницы в эуплоидности эмбрионов.
ФАКТОРЫ, ПРЕДСКАЗЫВАЮЩИЕ ФОРМИРОВАНИЕ БЛАСТОЦИСТ И БИОПСИИ
Фозраст женщины старше 37 лет,
получено менее 10 ооцитов,
зрелость менее 34%,
И/или процент оплодотворерия менее 60%.
Вклад незрелых клеток в количество бластоцист:
Оплодотворяя 8 дозревших клеток мы получаем на 50% выше шанс на эуплодиный эмбрион.
КЛИНИЧЕСКИЕ ИСХОДЫ:
910 незрелых клеток, дозрели
509 оплодотворились
94 бластоцисты
37 эуплодиных - 4% от всех оплодотворенных клеток МII на 1 сутки после пункции.
3 ПЭ - 1 живорождение, 1 выкидыш.
2 переноса по 2 эмбриона - 1 одноплодная беременность
9 переносов по 2 эмбриона (1 из созревших, 1 из дозревших) - 3 отрицательных результата, 1 выкидыш, 1 двойня, 5 одноплодная беременость: 1 был определён по полу, что из дозревших;
2 из зрелых,
2 ещё ждут подтверждения.
ВЫВОДЫ:
Текущий анализ выявил, что эуплоидность эмбрионов, полученных из зрелых и дозревающих клеток, сопоставима.
Но, всего лишь небольшой процент, а именно, 4%, оплодотворенныж яйцеклеток дойдут до стадии бластоцисты.
Эта методика может быть применима для пациентов старше 37 лет, с количеством полученных яйцеклеток менее 10, процентом зрелости менее 34%, процентом оплодотврения менее 60%.
На мой взгляд, интересная методика. НО... чтобы получить 1 эмбрион нужно достаточно большое количество незрелых клеток, дополнительное использование расходных материалов, и, как следствие, удорожание всего процесса.
Что думаете на этот счёт?