Рождение здорового ребенка является целью каждого цикла ЭКО/ИКСИ. Но, не смотря на все достижения в области ВРТ, процент наступления беременности все еще не 100%.
Одной из причин этого является ограниченная эффективность отбора эмбрионов для переноса, который традиционно основывался на морфологических оценках. Недавно были предложены новые методы для улучшения качества систем культивирования и облегчения отбора жизнеспособных эмбрионов для переноса с использованием более эффективных методик. Биопсия клеток трофэктодермы (te) является стандартным методом для диагностики эмбрионов, поскольку хромосомные аномалии являются основной причиной неудачи имплантации, особенно у женщин старшего репродуктивного возраста. С целью улучшения отбора эмбрионов было предложено предимплантационное генетическое тестирование на анеуплоидии для оценки состояния плоидности эмбрионов перед переносом.
Хотя в целом процедура считается безопасной, изучаются альтернативные источники эмбриональной ДНК. Недавно в бластоцельной жидкости была обнаружена ДНК, которая накапливается в полости расширенных бластоцист, в виде свободной ДНК или ДНК, заключенной в мембранные везикулы, высвобождающиеся во время апоптоза и репликации клеток. После предварительных исследований на анеуплоидных бластоцистах новый метод состоял в том, чтобы проверить, действительно ли бластоцельная ДНК является репрезентативной для генома эмбриона. Выявлено, что присутствие ДНК в бластоцеле, обнаруженное с помощью амплификации всего генома (wga), было связано с состоянием плоидности бластоцисты, определяемым биопсией клеток. ❗Частота положительной амплификации бластоцельной ДНК была значительно ниже в te-эуплоидных бластоцистах (45%), чем в te-анеуплоидных бластоцистах (81%). ❗Что еще более важно, после переноса te-эуплоидных бластоцист частота продолжающейся клинической беременности была значительно выше в группе с отрицательной амплификацией ДНК из бластоцеля(68%) по сравнению с пациентами с положительной амплификацией (31%).
Эти результаты позволили предположить, что состояние плоидности эмбриона может влиять на содержание ДНК в соответствующем бластоцеле, и предложили результаты wga(амплификации) в качестве инструмента для оценки эуплоидных бластоцист для переноса. Поэтому авторы статьи решили исследовать эти данные в рамках перспективного подхода.
Целью настоящего исследования было проверить, может ли отсутствие или присутствие ДНК в бластоцеле, обнаруженное с помощью используемого анализа wga(амплификации), быть допустимым методом определения приоритетности эмбрионов для переноса как в циклах pgt-a, так и в обычных циклах ЭКО/ИКСИ.
✅Основным исследованным результатом был коэффициент живорождения.
Материалы и методы это было проспективное исследование, проведенное в период с января 2019 по декабрь 2021 года. Было две группы пациентов:
🟠пациенты, проходившие пгт-а (1-я группа-102 пациентки, (средний возраст матери 37,9±4,6 года), которым были проведены циклы ПГТ-А из-за старшего репродуктивного возраста или повторных неудач ЭКО. Для переноса рассматривались только эуплоидные бластоцисты)
🟠пациенты, проходившие традиционное ЭКО/ИКСИ (2-я группа-88 пациенток с первой и второй попыткой ЭКО, средний возраст 33,7 ± 5,4 года).
Бластоцентез, амплификация и витрификация бластоцист в обеих группах был собран из расширенных бластоцист высокого качества, жидкость бластоцеля(bf) была аспирирована с помощью иглы ICSI, которая вводилась в полость бластоцела.
Результаты в группе 1
▶️общая неудача амплификации bf-днк составила 37,8%, но показатели варьировались в зависимости от состояния te-хромосомы, доля отрицательных bf- wga значительно выше в te-эуплоидных бластоцистах (42,9%), чем в te-анеуплоидных бластоцистах (33,9%).
▶️ни возраст женщин, ни тяжесть состояния по мужскому фактору, по-видимому, не оказали существенного влияния на результаты bf-wga. Тем не менее, наблюдалась тенденция к преобладанию положительного bf-wga в бластоцистах у пациентов с тяжелым мужским фактором (63,0% при тяжелом мужском факторе против 52,3% у пациентов с нормозооспермией и 56,0% у пациентов с умеренным мужским фактором).
всего было выполнено 150 переносов: 73 с эуплоидными бластоцистами, показавшими отрицательный результат bf-wga, и 77 с эуплоидными бластоцистами, получившими положительные результаты bf-wga.
▶️в общей сложности было зарегистрировано 64 клинические беременности, 55 из которых закончились нормально.
▶️Процент живорождения на перенос был значительно выше для эуплоидных бластоцист с отрицательными результатами bf-wga (52,1%) по сравнению с таковыми с положительными результатами bf-wga (22,1%)
▶️при первом переносе эмбрионов 60 пациенток перенесли отрицательные бластоцисты bf-wga и 42 положительные бластоцисты bf-wga: процент живорождения составили 53,3% и 26,2% соответственно.
▶️чтобы оценить эффективность, связанную с результатами bf-wga, был рассчитан общий процент живорождения у 50 пациентов, у которых переносились только отрицательные бластоцисты bf-wga, по сравнению с 42 пациентами, у которых всегда переносились положительные бластоцисты bf-wga (смешанная группа была исключена); значения clbr составили 70% и 35,7% соответственно.
Результаты в группе 2
▶️В отличие от 1-й группы, большинство показали отрицательное усиление (55,6% против 37,8% в 1-й группе)
▶️возраст матери в этой группе пациенток был ниже (33,7 ± 5,4 года) по сравнению с 1-й группой (37,9 ± 4,6 года, р 0,001).
▶️возраст матери или мужской фактор не имели никакой корреляции с результатами bf-wga.
Всего выполнено 128 переносов, 76 с отрицательными бластоцистами bf-wga, а остальные 52 с положительными бластоцистами bf-wga. В итоге получено 55 клинических беременностей, 48 из которых закончились родами
▶️Процент живорождения на перенос составил 50,0% для бластоцист с отрицательным результатом bf-wga и 19,2% для бластоцист с положительным bf-wga
▶️живорождение при первом переносе эмбрионов после первого переноса 30 родов произошли от бластоцист с отрицательным bf-wga (48,4%) и три - от переноса c положительным bf-wga (11,5%).
▶️кумулятивный процент живорождения на пациента у 46 пациентов все 56 переносов были проведены с отрицательными бластоцистами bf-wga, у 26 - с положительными бластоцистами bf-wga за 30 циклов переноса, тогда как остальные 16 пациентов получили оба типа бластоцист за 42 цикла переноса; результирующие процент живорождения составили 60,7%, 13,3% и 23,8% соответственно.
▶️Кумулятивный процент живорождения, связанный с результатами bf-wga, оценивался у 46 пациентов, у которых переносились только отрицательные бластоцисты bf-wga, по сравнению с 26 пациентами, у которых всегда переносились положительные бластоцисты bf-wga. выявленные показатели составили 73,9% и 15,4% соответственно.
Обсуждение согласно полученным результатам, бластоцисты с отрицательным bf- wga имели больше шансов имплантироваться и развиться до срока, чем бластоцисты с положительными результатами bf-wga. Этот тезис подтвердился для циклов pgt-a, так и для обычных циклов ЭКО/ИКСИ, подтверждающих, что наличие ДНК (bf-wga) может свидетельствовать об аномальном эмбрионе, вероятно мозаичном, который пытается достичь жизнеспособного состояния путем вытеснения анеуплоидных фрагментов на периферию эмбриона.
Результирующая вероятность жизнеспособности эмбриона будет зависеть от степени мозаицизма и от количества энергии, необходимой для вытеснения анеуплоидных клеток в бластоцель. Если этот баланс благоприятен, полученный эмбрион может имплантироваться даже в случае положительных результатов bf-wga. И наоборот, отрицательный bf-wga может отражать спокойное метаболическое состояние эуплоидных бластоцист, при котором процессы некроза и апоптоза протекают с меньшей вероятностью, что придает этим бластоцистам наивысший потенциал.
Набор эмбриональных хромосом изменяется в процессе развития эмбриона, причем самый высокий уровень хромосомных аномалий наблюдается у эмбрионов на стадии дробления по сравнению с бластоцистами.
Мозаицизм встречается особенно часто у пациентов с тяжелым мужским фактором, что позволяет предположить мужское бесплодие как фактор, связанный с мозаицизмом эмбрионов. Наблюдаемая в группе 1 тенденция к более высокой частоте положительных результатов bf-wga у эмбрионов, полученных от пациентов с тяжелым мужским фактором, хотя и не является статистически значимой, может подтвердить этот вывод, доказывая необходимость дальнейших исследований. Некоторые авторы утверждают, что мозаичность, о которой сообщается в pgt-a, является артефактом, вызванным генетическим анализом лишь нескольких клеток, извлеченных с помощью процедур биопсии, которые потенциально содержат как интактные клетки, так и фрагментированный клеточный материал. С другой стороны, было высказано предположение, что большинство человеческих эмбрионов являются анеуплоидными или мозаичными, причем большинство из них поддерживают низкий уровень мозаичности на протяжении всего развития, поэтому мозаичная анеуплоидия является нормальной особенностью развития у многих видов млекопитающих, включая человека, и по этой причине вполне вероятно, что некоторая степень диссегрегации у раннего эмбриона могла бы иметь некоторые положительные биологические преимущества. Эти соображения о раннем эмбриогенезе подразумевают некоторые механизмы самокоррекции. Существующие механизмы могли бы позволить изолировать аномалии от внутренней клеточной массы (icm), включая их преимущественное распределение в структурах, которые непосредственно не участвуют в развитии плода. Недавнее исследование проанализировало судьбу анеуплоидных эмбрионов 3-го дня в четырех компартментах бластоцисты, а именно внутриклеточная масса, трофэктодерма, бластоцель и периферических клеток, исключенных из собственно бластоцисты. Эти данные показали преимущественное распределение анеуплоидных клеток, исключенных из бластоцисты, в бластоцеле, что обеспечивает биологическое объяснение того, почему положительная бластоциста bf-wga имеет меньшие шансы на развитие, выявляя эмбрион, которому пришлось принять меры по самокоррекции для достижения хромосомно нормального состояния.
С точки зрения будущего, будет интересно проверить, применимы ли результаты, полученные здесь для bf-wga, также к среде для культивирования бластоцист. Это имело бы важные последствия для клинического применения неинвазивной ПГТ (nipgt), которая в настоящее время находится в стадии исследования. Если многообещающие результаты, связанные с nipgt, подтвердятся, корреляция с результатами bf-wga может дать соответствующую информацию для начальной фазы эмбриогенеза.
❗в заключение❗
данные этого проспективного исследования определяют bf- wga как потенциальный минимально инвазивный инструмент для отбора наиболее жизнеспособных эмбрионов у пациентов, проходящих ПГТ-А или традиционные циклы ЭКО/ИКСИ. Перенос отрицательных бластоцист bf-wga привел к значительно более высокому проценту живорождения на перенос и на одного пациента и, что очень важно, к улучшению исхода при первом переносе эмбриона. Если этот вывод подтвердится на более крупном наборе данных, такой простой и экономичный инструмент, а именно обработка жидкости бластоцеля с помощью амплификации, может стать ценным вариантом, позволяющим предложить пациенткам самые высокие шансы на доношенную беременность в кратчайшие сроки.