Клеточная мембрана является ключевым элементом клетки, отвечающим за её функционирование. Проницаемость этой мембраны играет решающую роль в регуляции обмена веществ и взаимодействия клетки с внешней средой. Исследование механизмов проницаемости клеточной мембраны является актуальной задачей в современной биологии и медицине, поскольку понимание этих процессов позволяет разработать новые методы диагностики и лечения различных заболеваний. Химия белка — это особая область, которая соединила в себе идеи и методы биологии, химии, физики, медицины. Белки — материальная основа деятельности клетки. Функции белков в природе универсальны: каталитические, транспортные, защитные, структурные, сократительные, дыхательные, запасные, регуляторные. Невозможно представить работу генетического аппарата клетки без участия белков, осуществляющих репликацию, транскрипцию, трансляцию информации. Белки принимают участие в построении мембран и тем самым ответственны за отделение клетки от внешней среды и разделение внутриклеточного пространства. Белки- переносчики осуществляют, например, электронный перенос при дыхании и фотосинтезе, а в других случаях они транспортируют продукты обмена веществ. Резервные белки, такие как альбумин яичного белка или казеин молока, образуют запас аминокислот для растительного эмбриона. Разработаны к настоящему времени методы разделения исключительно эффективны. Для разделения белков на фракции используется метод высаливания NaCl, NH4CL, и особенно (NH4)2SO4 – создает высокую ионную силу раствора и очень хорошо растворяется в воде. Разделение белковой смеси при добавлении смешивающихся с водой органическим растворителем, этанолом (фракционирование растворителем), что ведет к снижению диэлектрической проницаемости системы. Метод: Осаждение (изоэлектрическое осаждение, осаждение растворителем, осаждение солями). Свойства, положенное в основу метода: различная растворимость. Для количественного определения использована биуретовая реакция. Реакция основан на образовании фиолетового медного комплекса, интенсивность окраски которого (540-560 нм) может быть измерена колориметрически. Гораздо более высокую чувствительность имеет метод Лаури. в котором при участии остатков Тrр. Тyr и Cys образуется комплекс белка с фосфомолибденовой кислотой и медью. Это наиболее часто применяемый колориметрический метод определения малых количеств белка. Образующийся голубой комплекс (максимум абсорбции при 750нм) достаточно устойчива для количественного определения. В качестве стандартного белка служит сывороточный альбумин. Предел обнаруживания 5-10 мкт/мгл раствора. Определению по методу Лаури мешают трис-буферы, гуанидин- и тиолсодержащие соединения. Эти факторы не оказывают влияния на результаты при определении белка по Бредфорду. При количественном определении по Кьельдалю аналитическая проба разрушается при кипячении с конц. серной кислоте в присутствии катализатора. Причем органически связанный азот образует эквивалентное количество сульфата аммония. Выделяющийся при добавлении щелочи аммиак поглощается раствором борной кислоты и определяется титрованием 0,001 н. H2SO4. Цветные реакции. Применяемые для качественного определения белков. 1. Биуретовая (смешивают сильнощелочной раствор пробы с раствором сульфата меди (II)), пептидная связь-пурпурно-фиолетовая окраска; 2. Миллона (нагревают раствор пробы с Hg(NO3)2 и конц. H2SO4), реагирующий участок белка Tyr, красно-коричневая окраска; 3. Паули (смешивают щелочной раствор пробы с диазобензолсульфокислотой), реагирующий участок белка Tyr, His, красная окраска; 4. Хопкинс-Коле (смешивают пробу с глиоксиловой кислотой и под слой вводят конц. H2SO4), реагирующий участок белка Trр, фиолетовое окрашивание; 5. Сакагучи (смешивают пробу с растворами α-нафтола и гипобромита), реагирующий участок белка Arg, красная окраска; 6. Фолина (смешивают пробу с 1, 2-нафтахинон-4-сульфоновой кислотой), реагирующий участок белка Tyr, Trр; 7. Ксанто-протеиновая (смешивают пробу с конц.1. HNO3), реагирующий участок белка Tyr, Phe, желтая (после добавления щелочи оранжевая) окраска.
1 год назад