Иногда пациент приходит за результатом и слышит: «Анализ нужно пересдать, образец оказался непригоден». В голове сразу возникает мысль, что лаборатория плохо работает, хотя в большинстве таких случаев виновата не лаборатория и не пациент по отдельности — виновата преаналитика. Это весь путь пробы от момента, когда медсестра завязала жгут, до момента, когда пробирка попала в работу. И здесь скрывается больше критичных точек, чем в самом секвенировании.
Первая ловушка — выбор пробирки. Для генетических исследований кровь забирают в пробирки с антикоагулянтом ЭДТА, потому что гепарин ингибирует ПЦР, а сыворотка не подходит, поскольку в ней нет ядерных клеток. Если медсестра по привычке набрала кровь в гепариновую пробирку «как для биохимии», ДНК физически выделить можно, но дальше реакция не пойдёт — это надо переделывать.
Вторая — гемолиз. Если пробирку слишком долго трясли в дороге, перепадало давление, или иглу держали в вене с неправильной техникой, эритроциты разрушаются и в плазму попадает гемоглобин. Для биохимии это испортит часть показателей, а для молекулярных тестов гемоглобин — ингибитор ПЦР, и реакция теряет чувствительность.
Третья — сгустки. Если пробирку с ЭДТА сразу не перевернули несколько раз для перемешивания антикоагулянта с кровью, образуются микросгустки, которые забивают наконечники автоматов и портят выделение ДНК. Внешне такая пробирка может выглядеть нормально, но под микроскопом картина другая.
Четвёртая — температурный режим. Большинство клинических образцов перевозятся в холодовых сумках при 2–8 °C, и нарушения этого режима в течение нескольких часов обычно не критичны. А вот замораживать-размораживать ДНК-содержащие образцы повторно нельзя: каждая «волна» оттаивания повреждает структуру нуклеиновых кислот, и при попытке использовать такой материал на длинных фрагментах результат будет рваный.
Пятая — паспорт пробы. Идентификация образцов в клинической лаборатории работает по штрих-кодам и двойной верификации, и, если на пробирке невозможно прочитать наклейку, лучше пересдать, чем рисковать перепутать пробу с соседней. Это не паранойя — это норма по ISO 15189.
Шестая, самая системная — гайд для пациента. Часть клинических анализов чувствительна к диете и времени суток (например, гормоны и липиды), но классические тесты ДНК — нет: гены не меняются от того, поел ли человек завтрак. Главное — приходить чистым, без пота на сгибе локтя и без следов крема, потому что для исследований из буккального соскоба загрязнение средствами по уходу даёт перекрёстные сигналы.
В лаборатории Геномед каждая партия пробирок проверяется по контрольным пробам, а отдел приёмки отдельно фиксирует все нарушения преаналитики и связывается с направившим медучреждением.
Каталог исследований и требования к материалу: https://genomed.ru