1. В воде могут содержаться микроэлементы, вещества органической природы, которые приведут к угнетению роста или даже гибели клеточной культуры
Например,
10 мкМ сульфата меди приводит к полному угнетению клеточной культуры, а если взять хлорид меди, то и 5-6 мкМ будет достаточно (экспериментальные данные на основе клеточной культуры CHO К1);
0,3% полисорбата 80 приводит к лизированию клеточной массы и он используется для выделения вирусных векторов во время производства аденовирусных (экспериментальные данные на основе клеточной культуры HEK293).
2. Питательные среды (для СHO) обычно содержат до 50-100 различных компонентов, которым найден определенный баланс для достижения определенной цели в ходе культивирования
Например,
10-100 мМ солей марганца приводит к облегчению процессов гликозилирования белка, что в свою очередь может изменить характеристики продукта. Марганец выступает кофактором гликозилтрансферы, которая отвечает за созревание олигосахаридного профиля будущего рекомбинантного белка (экспериментальные данные полученные на основе клеточной линии СHO К1 при производстве моноклональных антител).
3. Микроорганизмы, содержащиеся в воде, при попадании в раствор питательной среды могут увеличить свою биомассу и привести к последующей утилизации раствора
Безусловно, на производстве используют фильтрованную питательную среду, однако, при активном бактериальном росте и после фильтрации могут содержаться значительное количество эндотоксинов, которые вызывают угнетение клеточной культуры.
Таким образом качество воды крайне важно для приготовления питательной среды и последующего культивирования. Обычно для целей GMP-производства используют воду для инъекций, а лабораторных и исследовательских целях можно применять воду из систем очистки типа Milli-Q.
Спасибо за внимание! Буду очень признателен если дадите обратную связь по материалу с указанием имеющихся в нем проблем (некорректная информация, не затронуты важные вопросы, хотелось бы видеть больше информации и др.). Обратная связь будет очень полезна для развития данного познавательного раздела.
(ПБ.1.1)
*ПБ - практическая биотехнология, первая цифра - номер раздела, вторая цифра - порядковый номер статьи для удобства навигации