В предыдущих публикациях мы рассмотрели основные принципы магнитной сепарации клеток, а также ознакомились с выделение клеток, положительных по CD-маркерам.
Но что делать, если наши клетки не имеют таких маркеров или надо выделить несколько субпопуляций клеток? Как выделить такие клетки? Для таких типов клеток используются метод негативной магнитной селекции. В этом случае, мы используем антитела с магнитными микрочастицами, чтобы пометить ненужные типы клеток. При помещении в магнитное поле, все ненужные клетки, с магнитными комплексами на мембране, будут обездвижены, и мы можем спокойно собрать нужные нам клетки для дальнейшей работы. Этот метод используется в наборах RWD для отбора:
- NK-клеток (Natural killer cells, NK cells) человека или мыши, которые реагируют на заражение организма внутриклеточными бактериями и вирусами, уничтожая инфицированные клетки, а также принимают участие в работе противоопухолевого иммунитета.
- B-лимфоцитов мыши, которые играют важную роль в иммунных реакциях, поскольку в ответ на раздражение антигеном или стимуляции T-клетками, B-лимфоциты начинают вырабатывать антитела.
- Наивных CD4+ лимфоцитов мыши, предшественников В-клеток, которые ещё не встречались с антигеном.
- Наивных CD8+ лимфоцитов мыши, незрелых цитотоксических Т-клеток, которые дифференцировались в тимусе.
Изучение этих типов клеток очень важно для изучения и понимания механизмов иммунного ответа организма на вирусную или бактериальную угрозу, а также изучения механизмов противоопухолевого иммунитета.
Метод негативной сепарации позволяет быстро и эффективно выделить нужную популяцию клеток и использовать для получения моноклональных клеточных культур, для последующего использования в биотехнологическом производстве антител.
Другой вариант применения метода негативной сепарации как вспомогательного — это выделение пула клеток для последующего секвенирования или изучение м-РНК репертуара клеток методам Single-Cell RNA-Seq (scRNA-seq).
Компания RWD предлагает 2 версии наборов для негативной сепарации: на колонках и без колонок.
Как работает метод выделения клеток на магнитных колонках, мы писали в предыдущем сообщении. Но в отличие от позитивного метода, при негативной селекции нас интересуют те клетки, что прошли через колонку и никак не прореагировали на магнитное поле.
Метод негативной селекции без использования колонок подразумевает использование кольцевого магнита, в который ставится пробирка с клетками. Негативные клетки, не находящиеся под влиянием магнитного поля, могут быть перелиты в чистую пробирку для дальнейшего использования.
Протокол без колоночного метода негативной магнитной сепарации еще проще, поскольку нам не надо элюировать клетки, достаточно просто собрать те клетки, что не связаны магнитным полем.
- Добавление антител, меченных биотином к суспензии клеток.
- Добавление в пробирку магнитных наночастиц, меченых стрептавидином.
- Установка пробирки в магнитный штатив на 5 минут.
- Забираем те клетки, что остались свободно плавать в пробирке для дальнейшей работы.
Также, компания RWD выпустила 2 универсальных набора с магнитными частицами, покрытыми стрептавидином и антителами к FITC, что позволит использовать эти частицы с любыми антителами, меченными биотином или FITC для изоляции клеток других типов.
Компания Диаэм — это официальный дистрибьютор компании RWD на территории России и Армении. Узнать больше о наборах или оформить заказ Вы можете на нашем сайте Диаэм.