ИХА и ИФА тесты — это иммунологические методы обнаружения определенных веществ, таких как антитела или антигены, но с разным типом метки: ИФА использует ферменты, а ИХА (иммунохроматографический анализ) — люминесценцию или другие быстрые методы. ИФА обеспечивает высокую чувствительность и возможность количественного анализа, в то время как ИХА является более быстрым, часто качественным экспресс-методом, используемым, например, для анализа пищевых продуктов на аллергены.
ИФА (иммуноферментный анализ)
- Основан на выявлении продуктов ферментативных реакций. Он использует антитела, связанные с ферментами, для обнаружения конкретных антигенов (веществ).
- Высокая чувствительность, позволяющая выявлять низкие концентрации веществ, и возможность количественного определения.
- Требует специализированного лабораторного оборудования и времени для проведения анализа.
- Используется для определения остатков ветеринарных препаратов (антибиотиков, микотоксинов), пестицидов и других нежелательных компонентов в пищевой и кормовой продукции.
ИФА тесты (иммуноферментный анализ) для продуктов — это лабораторные методы обнаружения и количественного определения различных компонентов в пищевых продуктах и кормах, таких как аллергены (например, глютен, соя), антибиотики, микотоксины, а также другие нежелательные вещества для обеспечения безопасности продукции. Эти тесты основаны на специфической реакции антиген-антитело, где фермент, прикрепленный к антителу, вызывает окрашивание, интенсивность которого зависит от количества определяемого вещества.
Основные области применения ИФА тестов для продуктов:
- Обнаружение пищевых аллергенов. Выявление следов таких аллергенов, как глютен или соя, в различных пищевых продуктах для контроля соответствия требованиям маркировки.
- Контроль остатков ветеринарных препаратов. Определение антибиотиков (например, тетрациклин, фуразолидон, фторхинолоны) в мясе, молоке, рыбе, меде и других продуктах для предотвращения попадания их в пищу потребителей.
- Выявление микотоксинов. Обнаружение ядовитых веществ, выделяемых плесневыми грибами (например, доксинивалеол), в зерновых, кормах и других сельскохозяйственных продуктах.
- Контроль качества продукции. Оценка безопасности сырья, полуфабрикатов и готовой продукции на соответствие Техническим Регламентам Таможенного Союза (ТР ТС).
Как работают ИФА тесты:
- Связывание антигена с антителами. Специфические антитела, иммобилизованные на твердой фазе (например, в лунках планшета), связывают целевой антиген из образца продукта.
- Добавление конъюгированного антитела. После промывки добавляется второе антитело, которое также связывается с антигеном, но уже в другом месте (эпитопе).
- Ферментная реакция. При добавлении субстрата происходит ферментативная реакция, которая приводит к образованию окрашенного продукта.
- Количественная оценка. Интенсивность цвета измеряется спектрофотометром, и сравнение с показаниями стандартных растворов позволяет определить количество определяемого вещества в образце.
Преимущества ИФА тестов:
- Скорость анализа. Некоторые ИФА-тесты могут дать результат всего за 20 минут, что важно для экспресс-анализа.
- Высокая чувствительность. Метод позволяет выявлять низкие концентрации веществ.
- Удобство. Тесты разработаны для удобного и легкого анализа результатов, часто с использованием сводных таблиц.
Устройство ИФА тестов:
Тест-система представляет из себя многолуночный планшет с набором компонентов.
Оборудование:
полуавтоматический анализатор, термостат, качалки;
автоматический анализатор.
Метод - иммуноферментный анализ (ИФА): позволяет обнаружить антиген или антитела в исследуемом продукте.
Тип анализа - количественный: результат - числовое значение титра антигена или антител.
Влияние внешних факторов на достоверность результата полифакторное: температура, влажность, освещенность, качество воды, используемой для разведения буфера, наличие окислителей в окружающем воздухе, условия инкубации. Очень важна точность исполнения каждого этапа исследования.
Процесс анализа на примере 5-ти стандартного ИФА-теста ProGnosis BioTech:
В комплекте лунки и подложка, раствор для детекции, 5 основных стандартов.
- Устанавливаем в подложку лунки с антителами и под раствор для разведения
- Многоканальным дозатором вносим в пустые лунки для по 200 единиц раствора для детекции
- Одноканальным дозатором - По 100 микролитров каждого стандарта вносится в лунку с раствором и пипетируется для смешивания жидкости. На каждый стандарт – новый наконечник на дозатор.
- Далее с помощью многоканального дозатора из лунок с раствором для разведения переносим по 100 единиц в лунки с антителами, закрываем лунки для инкубации, ждем 15 минут.
- Этап промывания – вылить все реагенты, внести 300 мл промывочного раствора, сделали 3 промывки, отбивая остатки на салфетку.
- Далее в еще не успевшие пересохнуть лунки добавлем светочувствительный ТМБ-раствор и оставляем на 5 минут инкубироваться в темноте, после чего вносим стоп-раствор, цвет лунок изменится, который останавливает реакцию. После этого у нас есть час, чтобы оценить результаты.
- Вставляем кассету в планшет, его в ридер, ждем звукового сигнала.
- Программа к ридеру бесплатная, ключа не требует, скачивается с облака. Особые способы работы у клиентов без интернета или с закрытой сетью.
- Выбираем в программе: Микотоксин, дон обычный, single в нашем случае, так как мы делаем анализ в одной лунке, остальные 5 – стандарты
- Ждем несколько секунд – получаем результат – таблицу оптических плотностей и кривую с возможностью сохранить в виде файла для отчета.
Есть варианты 1-стандартного теста, при условии наличия подключения к интернету.
ИХА - Иммунохроматографический анализ
Тип устройства – индивидуальная тест-кассета с набором компонентов.
Метод - иммунохроматографический анализ (ИХА): обнаружение антигена или антител в биологическом материале.
Длительность исследования: 5...10 минут для тестов на антиген или 5...20 минут для тестов на антитела при комнатной температуре не ниже +15°С.
Оценка результата - визуальная, качественная, с помощью ридера.
Не требует специальной подготовки персонала лабораторий, достаточно точного следования инструкции.
Влияние внешних факторов на достоверность результата:
Методика разработана таким образом, что на тест-реакцию при соблюдении температурного режима исполнения анализа не влияют никакие другие факторы; если окружающая температура и температура компонентов набора и образца отличается от рекомендованной в инструкции, то необходимо учитывать, что в диапазонах ниже +2°С или выше +30°С возможно искажение результата, а в диапазоне от +2°С до +15°С возможно относительное замедление реакции.
Преимущества. Быстрота проведения анализа и простота исполнения, часто не требующая сложного оборудования.
Недостатки. В основном качественный метод, указывающий на наличие или отсутствие вещества, а не точное количество.
ИХА-анализ может использоваться для быстрого качественного скрининга наличия определенных загрязнителей в пищевых продуктах.
Виды иммунохроматографических тестов, их принципы работы и преимущества:
1. ИХА тесты на аллергены – это иммунохроматографические тесты, которые используются для обнаружения антигенов аллергенов (например, ракообразных, яичного белка, сельдерея, горчицы) в пищевых продуктах, смывах с оборудования или рабочих поверхностях. Они представляют собой быстрый и надежный способ самостоятельной проверки безопасности продуктов, выявляя следы аллергенов с лабораторной точностью.
Принцип. Тесты основаны на взаимодействии специфических антител с антигенами аллергенов, что приводит к визуальной реакции (например, появлению цветной полоски).
Применение. Используются для обнаружения аллергенов в пищевых продуктах, смывах с посуды и оборудования, а также на рабочих поверхностях в условиях пищевого производства или в быту.
Преимущества:
- Скорость. Результат обычно можно получить быстро, что важно для контроля безопасности.
- Простота. Тесты просты в использовании, что позволяет проводить их не только в лабораторных условиях.
- Надежность. ИХА тесты обеспечивают высокую точность определения антигенов.
Примеры ИХА тестов на аллергены:
- ХЕМАТест Ракообразные: Для выявления антигена ракообразных в продуктах и смывах.
- ProGnosis BioTech Allergen Egg Free test: Для обнаружения остатков яичного белка.
- ИХА-тест Allergen Mustard Free Test Горчица: Для выявления антигена горчицы.
В каких случаях применяются:
- Для проверки готовой пищи на наличие следов аллергенов.
- Для контроля чистоты оборудования и рабочих поверхностей на пищевых производствах.
- Для проверки продуктов на отсутствие аллергенных компонентов (например, "Allergen Egg Free test").
2. ИХА (иммуно-хроматографический анализ) тесты на микотоксины — это экспресс-методы анализа, основанные на реакции антител с микотоксинами, присутствующими в образцах, например, в сельскохозяйственных культурах или пищевых продуктах. Они позволяют быстро выявить наличие и количество микотоксинов, таких как афлатоксины, дезоксиниваленол и зеараленон, что важно для контроля качества и безопасности сырья на этапе приёмки.
Принцип действия:
- Реакция антиген-антитело. ИХА-тест использует специфическую реакцию между микотоксином (антигеном) и антителом к нему.
- Визуальная индикация. В зависимости от типа теста, реакция приводит к образованию окрашенной полосы на тест-полоске, интенсивность которой может быть измерена для количественного определения микотоксина.
- Пробоподготовка. Для анализа требуется простая пробоподготовка, включающая экстракцию микотоксинов из образца.
Применение
- Контроль качества сырья. ИХА тесты используются для быстрой оценки сельскохозяйственного сырья при его приёмке для предотвращения попадания зараженной продукции в дальнейшее производство.
- Анализ продуктов питания и кормов. Эти тесты помогают определить уровни микотоксинов в различных пищевых продуктах и кормах для обеспечения безопасности.
Преимущества:
- Скорость. ИХА-тесты позволяют получить результат очень быстро, часто за несколько минут.
- Простота. Процесс анализов прост, что делает его удобным для использования на месте, в том числе при приемке зерна.
- Портативность. Наборы для ИХА-тестов портативны и могут применяться вне лабораторных условий.
Примеры микотоксинов, определяемых ИХА тестами:
- Афлатоксины (B1, B2, G1, G2)
- Дезоксиниваленол
- Зеараленон
- Общие фумонизины (B1, B2, B3)
3. ИХА (иммунохроматографические анализы) тесты на токсины — это экспресс-методы диагностики, позволяющие обнаружить токсины бактерий. Принцип теста основан на взаимодействии антител с антигенами токсинов, что приводит к появлению окрашенной линии на тест-полоске, указывающей на положительный результат.
Как проводится анализ:
- Подготовка образца. Образец помещается в пробирку с буферным раствором и перемешивается для растворения.
- Нанесение образца. Несколько капель полученного раствора вносятся в специальное окошко тестовой кассеты.
- Ожидание результата. Через 10–20 минут появляются окрашенные линии, по которым интерпретируется результат.
Интерпретация:
- Положительный результат. Появляются обе линии — контрольная (C) и тестовая (T), что означает обнаружение токсина.
- Отрицательный результат. Появляется только контрольная линия (C), а тестовая (T) отсутствует.
ИХА тесты на токсины применяются для диагностики и своевременного выявления токсинов в пище.
Особенности метода:
- Экспресс-метод. Анализ занимает мало времени, результат можно получить в течение одного дня.
- Чувствительность. Метод достаточно чувствителен для обнаружения токсинов в образцах.
- Простота использования. Тест-кассеты позволяют провести анализ быстро и легко.
Пример проведения ИХА-теста с помощью ридера 3PRmini.
Этот анализ выходит значительно дешевле по расходным материалам, и при этом дает максимально быстрый качественный результат.
В наборе 48 тест-полосок.
Методика проведения анализа:
- берется средняя проба, измельчается
- взвешивается 5 гр пробы
- добавляется 15мл экстракционного раствора (жидкий йод)
- 5 минут встряхивается вручную или шейкером
- отстаивается до выпадения осадка (либо с помощью центрифуги)
отливается через фильтровальную бумагу получившуюся жидкость – 2 мл будет достаточно - берется либо 100 либо 200 мкл, в зависимости от типа анализа,
- вносится в лунку с антителами. В каждом тубусе идет 8 лунок – 8 тест полосок. Для исследования большого количества лунок лучше брать многоканальный дозатор, для одновременного анализа.
- 20 сек на реакцию в лунке
- 3 капли на тест полоску, где, через 3 минуты проявятся достоверные результаты
- данные оперативно считываются, ведь реакция не останавливается и еще через 2 минуты данные уже будут не точные.
Тест полоски предварительно откалиброваны, данные хранятся в облаке.
При проверке на ридере, прибор берет из облака предварительно откалиброванную кривую и использует ее для сравнения тест-полоски.
Аккредитованные методики находятся в базе производителя, доступны на сайте и по запросу. Поверка приборов доступна по заказу.
Получить бесплатную консультацию, подобрать и заказать необходимое лабораторное оборудование можно в ООО «КОЛБА».
ЗВОНИТЕ 📞 +7 473 200 9136
ПИШИТЕ 📩 info@kolba24.ru
НАПИСАТЬ В ЧАТ ➡️ https://t.me/kolba24_labbot
А ТАКЖЕ, ЧИТАЙТЕ НАС В
СМОТРИТЕ