ПЦР-тестирование, на данный момент, неотъемлемая часть жизни граждан всего мира (слабо касается только тех, кто на удалёнке и ИП, но посещение открытых официальных мероприятий для них иногда под вопросом, если нет теста).
При приёме на работу меня предупредили, что работа будет не тривиальная и проводить исследования - это лишь малая часть видимого айсберга. Но хорошая мотивация, как вы понимаете, готова топить айсберги пачками и меня не страшит работа, за которую хорошо благодарят.
Первый нетривиал у меня был через три недели после приёма - ПМЭФ2024. Меня обучили отбору мазков и в путь дорогу. Были выезды, стационарные посты. И вот, очередной форум раскрывает новые горизонты для совершенствования (вы не знаете как я это люблю..а кто знает, тот меня хорошо знает). Есть много оборудования и каждое интересно по-своему. Мне довелось попрактиковаться и освоить метод изотермической петлевой амплификации или LAMP.
Молекулярно-генетические исследования на основе LAMP получили широкое применение в медицинской практике. Ввиду своей специфичности, необходимость проводить анализ в краткие сроки стало важным вопросом на повестке.
Данная портативная мини-лаборатория предназначена для быстрого выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 в биологическом материале методом изотермической амплификации (многократное копирование определённых участков ДНК) в режиме реального времени из мазков, взятых со слизистой носоглотки и ротоглотки пациента, и мокроты.
Время проведения теста – около 50 минут, в т.ч. проведение пробоподготовки (очистка ДНК или РНК исследуемого объекта от примесей)– 5 минут/образец, постановка реакции изотермической амплификации – не более 45 минут.
Средняя производительность работы лаборатории «на потоке» – 20 образцов/час.
Чувствительность – от 100 копий.
Комплектация портативной лаборатории:
1. Устройство пробоподготовки (для выделения РНК вируса) – 1шт.;
2. Изотермический амплификатор (для проведения процедуры детекции) – 1шт.;
3. Автоматические микродозаторы – 2 шт.;
4. Одноразовые наконечники для микродозаторов;
5. Штатив для микропробирок;
6. Ноутбук.
Комплект расходных материалов, необходимых для проведения исследования:
1. Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2;
2. Набор реагентов для выделения РНК коронавируса SARS-CoV-2.
Достоинства метода
Метод LAMP позволяет провести то же исследование, что и с помощью ПЦР, но значительно быстрее, дешевле и обучить младший медицинский персонал для исследований, увеличив количество задействованных специалистов.
Амплификация на основе LAMP, в отличие от ПЦР, происходит при постоянной температуре без этапа термоциклирования (программируемое термостатирование, что позволяет заменить амплификатор обычным термостатом). Это делает исследование более доступным, в том числе, в рамках диагностики в условиях ограниченных ресурсов. В ходе реакции LAMP обратная транскрипция происходит при той же температуре, что и амплификация. Ha LAMP не влияет присутствие биологических компонентов. Образец может быть занесен в реакционную смесь без очистки. Компания «ТестГен» разработала и успешно вывела на рынок высокоточный набор для диагностики SARS-CoV-2. Получение результата в течение 50 мин. и его оценка невооруженным взглядом при помощи колориметрической детекции значительно повышает пропускную способность лабораторий. Возможно прямое внесение транспортной среды с респираторным мазком в реакционную смесь без этапа выделения нуклеиновых кислот.
Контаминация
Контаминация происходит от латинского слова «contaminatio», что означает «загрязнение». Один из самых пожалуй важных факторов работы с образцами. На достоверное исследование, то есть его суть, определение качественно «положительного» или «отрицательного» результата. Во время работы с образцами нужно работать очень аккуратно, для того, чтобы не было кросс-переноса, в случае одного из зараженных объектов. Тогда все остальные могут быть под угрозой недостоверности. Для того чтобы этого избежать нужна всего лишь правильная техника лабораторного эксперимента, а так же:
- Обученный медицинский персонал, для проведения исследований и отбора (неправильно отобранный образец - это некорректный результат)
- Необходимы отдельные помещения для каждого из этапов исследования (персонал должен работать только в своей зоне чтобы не было кросс-переноса ДНК)
- Каждый этап приготовления необходимо проводить в новых перчатках
- Наконечники от дозаторов менять после каждого аликвотирования (набор раствора реактива в дозатор) и они должны быть с фильтрами, чтобы не было контаминации через дозатор
- Работу с образцами и реактивами проводить в ПЦР-боксах или ламинарных шкафах, но без вытяжки (тяга может давать кросс-перенос из одной ёмкости для хранения образца в другую).
Наука и медицина это всегда интересно, увлекательно и всегда есть куда развиваться. На самом деле с с момента учебы и до нынешнего момента много всяких разных историй есть на такую тему, но многие потеряли актуальность и интерес. Но я постараюсь почаще писать что-нибудь свежее и занимательное.
Оставайся на связи и будь в курсе интересных статей, мой дорогой читатель😉
Читай меня в любом удобном виде в ВК, Дзен, Telegram.
#medicine #covid #science
