Цель бактериологического исследования
Выявление возбудителя дифтерии с помощью минимального количества диагностических тестов.
Необходимые и специфичные тесты
Для получения достоверного результата в максимально сжатые сроки проводится ряд обязательных тестов. Время получения ответа зависит от характера обнаруженных бактерий:
- Не менее трех суток — отрицательный результат.
- Три-четыре суток — положительный результат на наличие токсигенных коринебактерий дифтерии (возбудителя дифтерии).
- Четыре-пять суток — обнаружение нетоксигенных коринебактерий дифтерии или других представителей этого рода.
Возбудитель дифтерии
Corynebacterium diphtheriae — бактерия, продуцирующая дифтерийный токсин (экзотоксин), является основным возбудителем дифтерии.
Источники инфекции
- Больной.
- Бактерионоситель токсигенных C. diphtheriae.
Кровяные теллуритовые среды
Кровяные теллуритовые среды, такие как КТА и Клауберг II, являются лучшими селективными дифференциально-диагностическими средами. Эти среды обладают следующими преимуществами:
- Обеспечивают рост колоний уже через 24 часа, что сокращает срок выдачи окончательного бактериологического ответа на один день.
- Просты в приготовлении: в качестве основы используется коммерческий сухой питательный агар (СПА), к которому добавляют кровь или гемолизированные кровяные добавки.
Окрашивание мазков
Для окрашивания мазков при исследовании на дифтерию используется метод Лёффлера (щелочной метиленовый синий) или другие синие красители. Окраска по Граму не применяется, так как клетки грамположительных C. diphtheriae легко обесцвечиваются спиртом и могут выглядеть грамотрицательными (приобретая розовый оттенок).
Способы постановки пробы на токсигенность
Для проверки токсигенности Corynebacterium diphtheriae применяются следующие методы:
- Модифицированная проба Элека с бумажными полосками, утвержденная в 1961 году.
- Проба Фельдмана Ю.Г. и соавторов с бумажными дисками, утвержденная в 1988 году.
Использование антитоксина
Для предотвращения неспецифических линий преципитации микробного происхождения при постановке пробы используют только антитоксин — противодифтерийные антитоксические антитела, очищенные методом специфической сорбции.
Обязательные биохимические тесты
Для окончательной идентификации бактерий и проверки их токсигенности необходимо проведение следующих биохимических тестов:
- Тест на цистиназу.
- Тест на уреазу.
- Тест на расщепление глюкозы, сахарозы и крахмала.
- Тест на нитраты проводится только при положительной уреазной реакции.
Требования к взятию и транспортированию материала
Для получения точного результата исследования важно соблюдение всех этапов взятия и транспортировки материала:
- Использовать коммерческие стерильные сухие ватные (или дакроновые) тампоны.
- Материал из ротоглотки и носа берут отдельными тампонами натощак или не ранее чем через 2 часа после еды, до применения полоскания или других видов лечения.
- Тампоны должны иметь форму «капли», а не «веретена».
- Взятие материала осуществляется при хорошем освещении, с использованием шпателя, не касаясь тампоном языка и внутренних поверхностей щек и зубов.
- Материал с ротоглотки берут с миндалин, дужек мягкого неба, небного язычка, при необходимости — с задней стенки глотки.
- При взятии материала из носа используют другой тампон, который вводят глубоко сначала в один, а потом в другой носовой ход.
- При дифтерии других локализаций (глаза, уши, кожа, раны, гениталии) материал берут из ротоглотки и носа.
- При прямой ларингоскопии материал собирают непосредственно из гортани.
- При взятии материала с пораженного участка кожи поверхность протирают стерильной марлевой салфеткой или тампоном, смоченными стерильным физиологическим раствором.
Транспортировка материала
- Срочность доставки: Тампоны должны быть доставлены в лабораторию не позднее чем через 3 часа после взятия материала.
- Условия в холодное время года: Для предотвращения замерзания материал доставляют в бактериологическую лабораторию в сумках-термосах.
- При невозможности доставки: Если доставка в установленные сроки невозможна, материал из ротоглотки и носа засевают «площадкой» с последующим рассевом на одну чашку Петри с питательной средой, разделенной пополам («чашечный метод»).
Посев материала
При редких локализациях инфекций посев материала из каждого пораженного участка осуществляют на отдельную чашку Петри с питательной средой.
Для лабораторий, специализирующихся на микробиологических исследованиях, предлагаем обратить внимание на наш каталог Автоклавов! Также у нас на сайте Вы сможете найти больше интересных статей, новостей и товаров!