При всех методах окраски необходимо как для разведения красок, так и для споласкивания мазков употреблять дистиллированную, нейтрализованную воду. Дистиллированная вода чаще всего бывает слабокислой реакции. Обычными грубыми реакциями (лакмус) это установить нельзя. Реакцию воды можно определить несколькими способами. Рекомендуется для нейтрализации воды приготовить два раствора: 1%-ный раствор двууглекислого натрия и 1 %-ный раствор уксусной кислоты. Реакцию воды определяют следующим образом: в два совершенно чистых химических стаканчика наливают понемногу испытуемой дистиллированной воды. В один из них всыпают несколько крупинок гематоксилина и взбалтывают; другой служит для контроля. Если вода нейтральная, то не раньше чем через 1 минуту и не позднее чем через 5 минут вода приобретает очень слабый розовато-фиолетовый оттенок; если вода кислая, она пе окрашивается или окрашивается позднее чем через 5 минут. Если вода щелочная, то она приобретает розовато-фиолетовый оттенок раньше чем через 1 минуту.
Если вода окажется кислой, то в нее добавляют несколько капель раствора двууглекислого натрия, если щелочная, - то раствор уксусной кислоты. Затем воду снова испытывают, если нужно, добавляют еще тот или иной раствор, и так до тех пор, пока вода не приобретет необходимую реакцию.
Для определения реакции воды как индикатор используют 1 %-ный водный раствор нейтральрота. В два химических стакана наливают по 200 мл испытуемой воды и добавляют по одной капле раствора нейтральрота. Вода становится рубинового цвета (кисловатая вода). Затем в один стакан по каплям добавляют 1%-ный раствор углекислого натрия (точно считая капли), все время размешивая воду. Другой стакан контрольный. Вода при добавлении щелочи начинает постепенно приобретать оранжевый оттенок. Ее можно считать нейтрализованной при светло-оранжевой окраске. Не надо добавлять щелочи до вполне определенного оранжевого цвета или, тем более, до желтого, в этом случае вода станет щелочной.
Затем высчитывают количество щелочи, требуемое для нейтрализации необходимого нам объема воды, и добавляют в воду. Описанные способы просты, но кропотливы и требуют много времени. Наиболее доступен метод с забуферением воды, который заключается в том, что в дистиллированную воду добавляют смесь кислой и основной солей фосфатов натрия и калия, подобранных в определенной пропорции, что создает определенную концентрацию Н- и ОН-ионов.