Потенциал развития зрелых ооцитов, полученных в результате спасительного IVM в программах ВРТ
Получение зрелых ооцитов в циклах ВРТ является одним из ключевых компонентов успеха. В клинической практике оценка зрелости ооцита выполняется после денудации ооцита из ооцит-кумулюсного комплекса, и предполагается исключительно оценка ядерного созревания. Зрелые ооциты определяют как ооциты метафазы II (MII), в которых завершилось первое мейотическое деление и появилось первое полярное тело (PB). Процесс цитоплазматического созревания, который включает в себя широкий спектр метаболических и структурных модификаций, так же важен, как и ядерное созревание, для достижения компетентности ооцитов, но механизмы, лежащие в основе этого процесса, недостаточно изучены. При этом ни одна морфологическая характеристика не определяет его завершенность.
Незрелые ооциты, полученные после стимуляции, обычно считаются не подходящими для оплодотворения в программе ЭКО/ИКСИ. Тем не менее, ранее в исследованиях сообщалось о созревании in vitro (IVM) этих ооцитов, используя различные условия культивирования и продолжительность культивирования- «спасительное IVM» (rescue in vitro maturation)
➡ Цель: изучить потенциал незрелых ооцитов в стимулированных циклах, которые дозрели после спасительного IVM по сравнению с такими же ооцитами, дозревшими в стимулированном цикле in vivo
➡ Дизайн: ретроспективное когортное исследование
➡ Пациенты: Всего 182 пациентки, 200 циклов контролируемой овариальной стимуляции яичников с проведением ИКСИ, в которых были получены незрелые ооциты, и хотя бы один ооцит дозрел с помощью «спасительного IVM»(Центр лечения бесплодия CReATe, Торонто, Канада 🇨🇦)
➡ Вмешательство: среда для дозревания ооцитов на стадии GV (germinal vesicle) и метафазы I(MI), полученных в стимулированных циклах
➡ Протокол IVM и последущее культивирование эмбрионов
- денудация ооцита из ОКК (ооцит-кумулюсный комплекс) через 1-3 ч после пункции, оценка ядерного созревания
- ооциты на стадии GV и MI были помещены в среду Sage 1- StepTM (Copper Surgical, США) с добавлением 75 МЕ/мл ФСГ и 75 МЕ/мл ЛГ(Менопур, Ферринг) на ночь
- дозревшие в течение 17–24 часов с момента извлечения ооциты были оплодотворены спермой партнера или донора методом ИКСИ
- все оплодотворенные ооциты культивировали в каплях по 25 мл в инкубаторе Trigas (K-Systems или Embryoscope c cистемой time-lapse; Cooper Surgical, Vitrolife) при 5% O2, 5,5% CO2 и 89,5% N2 с использованием парафинового масла (OVOILTM, VitroLife, США)
- оценка оплодовтрения- через 16–18 часов после ИКСИ, нормальное оплодотворение было подтверждено обнаружением 2 полярных тел и 2 пронуклеусов, тогда как обнаружение одного пронуклеуса или 3 пронуклеусов классифицировали как аномальное оплодотворение. Дробление оценивали через 48 часов после обнаружения пронуклеусов
- большинство зигот 2PN были культивированы до стадии бластоцисты (86%- 172 из 200 циклов). Когда было получено крайне малое количество ооцитов и/или эмбрионы продемонстрировали сниженное качество, эмбрионы были криоконсервированы или перенесены на стадии дробления на 3-й день
➡ ❗️РЕЗУЛЬТАТЫ❗️
- Ооциты, дозревшие in vitro (из GV или MI) имели такой же процент оплодотворения (2PN), что и полученные зрелые MII ооциты (дозревшие in vivo)
- Не наблюдалось существенной разницы между различными типами ооцитов в отношении частоты аномального оплодотворения (1PN или 3PN)
- Скорость дробления была значительно ниже для зигот из дозревших GV и MI, чем для зигот, полученных из изначально зрелых оцитов стадии MII
- Частота бластуляции ( дорастание до стадии бластоцисты) была значительно ниже для дозревших GV и MI по сравнению со зрелыми изначально ооцитами стадии MII в расчете на зрелый ооцит и на зиготу, разница сохранялась для всех возрастных группх при стратификации по возрасту (<35, 35–39, ≥40 лет)
- Хотя процент бластоцист «хорошего качества», полученных из ооцитов GV и MI был ниже по сравнению с бластоцистами, полученными из изначально зрелых ооцитов MII, разница не была статистически значимой
- Не было существенной разницы в проценте эуплоидии, а также в проценте анеуплоидии между бластоцистами, полученными из дозревших GV или MI и бластоцистами, полученными из изначально зрелых ооцитов MII
- Для дозревших ооцитов GV и MI наблюдалась достоверно увеличенная продолжительность первого митотического деления и второго митотического деления по сравнению с изначально зрелыми ооцитами MII
- Значительная задержка синхронности расщепления бластомеров во втором цикле отмечалась для эмбрионов, полученных из дозревших ооцитов, по сравнению с эмбрионами из изначально зрелых ооцитов MII
- В целом, средние сроки от раннего дробления до начала бластуляции были быстрее в дозревших in vitro GV и MI по сравнению с контрольной группой (изначально зрелые MII)
- При этом никакой разницы не наблюдалось между исследуемой и контрольной группой при сравнении времени для формирования полной бластоцисты
- Интересно, что эмбрионы из дозревших in vitro ооцитов показывали значительно более высокие уровни мультинуклеации бластомеров на 2-клеточной и 4-клеточной стадии, а также более высокие уровни аномального дробления зиготы
➡ ОБСУЖДЕНИЕ
Наши данные подтверждают, что дозревшие in vitro ооциты демонстрируют нарушенную компетентность в развитии. Это характеризуются более низкой скоростью дробления, измененными морфокинетическими профилями, высокий мультинуклеацией бластомеров и более низкой скоростью бластуляции. Тем не менее, бластоцисты, полученные из таких ооцитов, показали сопоставимые морфологические характеристики, а также частоту эуплоидии по сравнению с бластоцистами, полученными из изначально зрелых ооцитов MII.
➡ ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Для пациенток с низким процентом дозревания и/или низким количеством зрелых ооцитов в день пункции спасительное IVM может предоставить более компетентные ооциты и дополнительные жизнеспособные бластоцисты для переноса из того же цикла стимуляции, максимизируя шансы на беременность и живорождение