Созревание ооцитов включает в себя процессы, которые необходимые для успешного оплодотворения и дальнейшего развития. Производилась оценка возможных потенциальных путей регуляции созревания ооцитов человека путем проведения анализа всего геномного транскриптома клеток гранулезы человека (GCs) и путем измерения гормонов и веществ, имеющих значение для созревания ооцитов в фолликулярной жидкости, собранной в 5 разных временных интервалах после введения ХГЧ/ аГнРГ для окончательного созревания ооцитов у пациенток в протоколе стимуляции яичников.
◾️ ВОПРОС ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ: Какие вещества и пути передачи сигнала потенциально активны после действия ФСГ и ЛГ в регуляции созревания ооцитов человека in vivo?
◾️ ОБЩИЙ ОТВЕТ: Регуляция созревания ооцитов человека, по-видимому, представляет собой многофакторный процесс, в котором активно участвуют несколько различных путей передачи сигнала
◾️ ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ, ОБЪЕМ, ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ: проспективное когортное исследование, Университетская больница Копенгагена, Дания,2016–2018гг.
- 50 пациенток, возраст до 36 лет
- стандартный протокол с антагонистами
- критерии ведения триггера- минимум 3 фолликула диаметром 17мм
- триггер- рХГЧ Овитрель 6500МЕ или агонист Гонапептил 0,2 мг за 36ч до пункции
- от каждой пациентки с наличием более 8 преовуляторных фолликулов диаметром 14 мм на исследование было передано содержимое одного фолликула после введения триггера
- кроме этого получали образцы во время пункции из первого аспирированного фолликула, содержащего яйцеклетку
◾️ ВРЕМЕННЫЕ ПРОМЕЖУТКИ ЗАБОРА ФОЛЛИКУЛЯРНОЙ ЖИДКОСТИ:
- перед введением триггера ( 0ч ) (группа 1, № = 23)
- через 12ч после введения триггера (группа 2, №=10)
- через 17ч после введения триггера (группа 3, № 6)
- через 32ч после введения триггера (группа 4, №11)
◾️❗️РЕЗУЛЬТАТЫ❗️:
🔹 Средний процент дозревания ооцитов составил 82% ( 41 M II на 50 ОКК)
🔹 Натрийуретический пептид С-типа (C-type Natriuretic Peptide)
Соответствующая экспрессия гена CNP в клетках гранулезы не продемонстрировала каких-либо существенных изменений в период окончательного созревания фолликулов. СNP не был обнаружен в протеомных данных и не присутствовал среди 400 наиболее распространенных белков, присутствующие в образцах фолликулярной жидкости
Напротив, экспрессия гена рецептора натрийуретического пептида
(NRP2, рецептор CNP) на клетках гранулезы была значительно снижена во время первых 12 ч после введения триггера
В то же время произошло значительное повышение экспрессии фермента фосфодиэстеразы 5A (PDE5A), который расщепляет и уменьшает цГМФ, это повышение сохранялось вплоть до 36 ч
🔹 Семейство эпидермальных факторов роста (The Epidermal Growth Factor Family)
Сильная активация AREG и EREG документируется в течение первых 17 ч после введения триггера, в то время как у бетацеллюлина (BTC) наблюдается лишь незначительное увеличение в тот же период
Гены рецептора EGF и рецепторы тирозинкиназы 2–4 (ERBB2, ERBB3 и ERBB4) почти постоянно выражены на относительно низком уровне
Напротив, ингибитор I обратной связи рецептора (ERRFI1), который ингибирует активацию EGFR, а также нисходящая сигнализация от ERBB2, ERBB3 и ERBB устойчиво и значительно повышаются во время окончательного созревания фолликулов, достигая относительно высокого уровня через 36 ч
Кроме того, измерения белка AREG подтвердили его быструю и очень значительную активацию в клетках гранулезы, и последующее его высвобождение во время всплеска в середине цикла, достигая почти 200 нг/мл в через 17 ч и снижаясь примерно до 60 нг/мл в интервале между 32 и 36 ч
Белок EREG обнаруживался только в 26% образцов фолликулярной жидкости
В данных протеомики белки EREG и BTC не были обнаружены
🔹 Ингибины и Aктивины (Inhibins and Activins)
Активин-А оставался ниже предела обнаружения в подавляющем большинстве образцов
Ингибин А достигал пика через 17 ч со средней концентрацией 264 нг/мл и впоследствии снижался, тогда как ингибин-В имел самую высокую концентрацию в 0 ч (369 нг/мл) и снижался через 17 ч
Активины вырабатываются в значительно более низких концентрациях, причем активин-В и активин АВ находятся в одном диапазоне
🔹 Стерол активации мейоза фолликулярной жидкости (Follicular Fluid Meiosis Activation Sterol)
Фермент, который превращает ланостерол в FF-MAS, значительно активируется в промежутке от 0 до12 ч после введения триггера
Экспрессия гена DHCR24 значительно снижается во время первых 12 ч окончательного созревания фолликулов, что свидетельствует о накоплении FF-MAS на ранних стадиях окончательного созревания фолликулов, потенциально для ускорения мейоза
🔹 Мидкин (Midkine)
Концентрации МДК повышались в промежутке от 0 до 12 ч и 17 ч после введения триггера. Затем концентрация МДК значительно снижалась в промежутке с 17 до 32 ч и 36 ч
Наблюдалась значительная активация IGTA6 во время первых 12 ч и NOTCH2 в течение первых 17 ч, а также подавление HSPG2 через 32 часа
🔹 Фактор дифференцировки роста-9 (GDF9) и костный морфогенетический белок-15 (BMP15)
(Growth differentiation factor-9 (GDF9) and bone morphogenetic protein-15 (BMP15))
Из всех 100 проб фолликулярной жидкости, в которых была проанализирована концентрация GDF9, только 17 показали измеримые концентрации. Средняя концентрация GDF9 составила 307 пг/мл (диапазон 126–550 пг/мл), при равном распределеним измеряемых выборок по временным точкам
Концентрация BMP15 также была проанализирована, но ни один из образцов не показал достаточной концентрации, подлежащей определению
◾️ ЗАКЛЮЧЕНИЕ:
Экспрессия и синтез веществ, ответственных за созревание ооцита, происходит достаточно быстро после введения триггера, в течение первых 12–17 ч. Это исследование демонстрирует сильную активацию веществ, в том числе AREG, ингибин-А и ингибин-В, МДК,и потенциально FF-MAS, в то время как эффект CNP, возможно, возникает на уровне рецепторов. Специфический эффект от GDF9 и BMP15 на созревание ооцитов менее вероятен.
Текущее исследование предоставляет новую информацию для улучшения условий дозревания ооцитов in vitro во время программ IVM, особенно capa-IVM