Ранее мы уже говорили, что можно использовать антитела для проведения анализов, давайте сконцентрируемся именно на них. Большие плюсы иммунологических методов – это их высокая чувствительность, специфичность и простота.
Для каких целей можно их использовать?
Тестирование на наркотики, оценка и мониторинг различных видов рака, обнаружение специфических метаболитов, обнаружение возбудителей инфекций.
Ограничения
Целевой эпитоп (о них мы писали в других статьях) может быть замаскирован, что даст ложноотрицательный или ложноположительный результат; Антитело может реагировать не на целевой эпитоп, что так же приведет к ошибке.
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Есть две разновидности – прямой ИФА и непрямой ИФА.
Прямой ИФА – это когда антитело взаимодействует с антигеном непосредственно, при этом антитело несет на себе фермент, который способен окрашивать среду. Итак, пришиваем антигены к подложке, затем обрабатываем антителами, часть из них связывается, часть – нет, промываем, а затем добавляем субстрат, который окрашивается в местах, где есть связанные с антигенами антитела.
Непрямой ИФА – образец тестируется на наличие специфического антигена, связанного с пластиковой планшеткой. Идея в том, что мы «пришиваем» антиген к пластиковой планшетке, добавляем первичные антитела, часть из них связывается с целевыми антигенами. Далее промываем планшет, смывая тем самым несвязанные антитела, а оставшиеся антигены блокируем. Далее добавляем вторичные антитела, которые связываются с первичными. То есть вторичные антитела воспринимают первичные антитела как антигены. Итак, вторичное антитело содержит фермент (например, щелочную фосфатазу), который может превращать бесцветный субстрат в цветной. Далее добавляют субстрат, он окрашивается там, где есть вторичное антитело, а соответственно и первичное. Это положительный результат реакции, если окраски нет, то отрицательный.
На этих принципах основана процедура ELISA. С ее помощью определяют, например, наличие антител к COVID-19.