Чтобы подтвердить, влияет ли джуглон на приток кальция или нисходящий сигнальный каскад, было определено влияние джуглона на кальциевые сокращения, опосредованные высвобождением внутриклеточного кальция. Ряд внутриклеточных органелл принимают вверх и выпускают Ca 2+ . Саркоплазматический ретикулум (SR) представляет собой самый большой пул высвобождаемого Ca2+ в гладкомышечных клетках. В ответ на различные стимулы Ca 2+ - высвобождающие каналы в SR, а именно ryanodine receptors (RyR) и inositol trisphosphate receptors (IP 3 Rs), опосредуют отток Ca 2+ из SR в цитоплазму клетки (Gommans et al., 2002; Хилл-Юбэнкс и др., 2011; Martinsen et al., 2014). Рецептор ryanodine играет важную роль в гомеостазе Ca 2+ в цитоплазме различных типов клеток ( Tokutomi et al., 2001). В этом исследовании джуглон подавлял сокращение в ответ на кофеин. Поскольку кофеин индуцирует сокращение гладких мышц за счет высвобождения кальция из внутриклеточных запасов кальция через активацию рианодин-чувствительных рецепторов ( Dick and Sturek, 1996), эти данные поддерживают идею о том, что юглон действует ингибировать кальцийзависимый сигнальный путь, общий как для притока внеклеточного кальция, так и для высвобождения внутриклеточного кальция. Эти данные подтверждаются экспериментами, показывающими, что юглон предотвращает сокращение, вызванное циклопиазоновой кислотой (специфическим ингибитором Ca 2+ АТФазы) ( Seidler et al., 1989; Munro and Wendt, 1994). Кроме того, юглон также предотвращал сокращение, вызванное иономицином, что приводит к внеклеточному поступлению Ca2+ через отверстие пор в плазматической мембране ( Dick and Sturek, 1996). Предварительная обработка нифедипином (блокатором кальциевых каналов L-типа) не изменила реакцию, вызванную иономицином, что подтверждает, что сокращение до иономицина не зависит от активации кальциевых каналов L-типа, и поддерживает идею о том, что юглон не действует в качестве блокатора кальциевых каналов L-типа, а действует ниже кальция.
Если юглон ингибирует сократительный механизм вниз по течению от кальция, то можно ожидать, что юглон также будет производить релаксацию после предварительного сокращения с KCl. Тот факт, что это не происходит, по крайней мере в отсутствие эндотелия, может быть связано с тем, что сокращение, вызванное увеличением внутриклеточного кальция, вызванного KCl, труднее обратить вспять, чем более избирательное увеличение кальция, вызванное активацией рецептора или заливом K8644. Действительно, на фиг. 6, juglone производит большее ингибитирование кальци-наведенного сужения причиненного заливом K8644 и U46619 сравненным к присутсвию KCl сравнивает Fig. 6 а с ( Рис. 6B & C). Хотя KCl и Bay K8644 оба приводят к активации кальциевых каналов L-типа, есть доказательства того, что KCl может привести к активации других каналов, в том числе рецепторов TRP ( Ratz and Berg, 2006). Кроме того, KCl эффективно зажимает открытые кальциевые каналы, что приводит к потоку кальция в клетку. Это может перегрузить клетку с кальцием делая его более трудным обратить. Когда концентрация кальция, поступающего в клетки, ниже (как и в кривых реакции на концентрацию кальция в ( Фиг. 6), сужение заблокировано джуглоне.
Протеинкиназа с ( ПКК) активируется кальцием и участвует в тромбоксан-опосредованном сокращении в свиной коронарной артерии (Nobe et al., 2006). Поэтому мы определили влияние джуглона на PKC-опосредованное сокращение с помощью PKC-активатора PMA. Юглоне заблокировал вызванное ОДК сужение, показывая что оно может заблокировать ПКК-посредничанное сужение. Эти данные показали, что джуглон может действовать либо как ингибитор PKC, либо он ингибирует сигнальный путь вниз по течению от PKC.
5. Заключение
В заключение мы отметили, что юглон вызывает большую релаксацию коронарной артерии свиньи как через эндотелийзависимый механизм, включающий no / cGMP путь, так и эндотелийнезависимый путь, ингибируя кальцийзависимый сигнальный путь, возможно, с участием протеинкиназы С.