Механизмы, опосредующие сосудорасширяющие эффекты юглона в изолированной коронарной артерии свиньи. Продолжение 2.

2.7. Статистический анализ

Полученные данные представлены в виде средней процентной релаксации u46619-индуцированного тона со стандартной ошибкой среднего (S. E. M.). Статистические различия между двумя группами определялись с помощью двухвалентного парного T-критерия Стьюдента. Статистические различия между более чем двумя группами определяли с помощью двухсторонней ANOVA с последующим пост-специальным тестом Бонферрони, используя GraphPad Prism version 8 (Graphpad Pad, San Diego, CA, USA). Значение P меньше 0,05 (* p

3. Результаты

3.1. Джуглон продуцировал релаксацию против сокращения, вызванного U46619 и KCl в кольцах коронарной артерии свиньи

Юглон вызывал концентрационно-зависимый вазорелаксантный эффект в u46619-индуцированных предэкстракционных сегментах Пкя (см. след на фиг. 1 Б). Релаксация составила 90,0 ± 3,4 % при 30 мкм (максимальная используемая концентрация) по сравнению с контролем (ДМСО), где максимальная релаксация составила 10,1 ± 2,0 % ( Рис.2). 2 A) (см. трассировку на фиг. 1 B и D). Юглон также оказывал релаксантный эффект ( 79,9 ± 2,4 %) в тканях, предварительно контрактированных с KCl, со слегка сниженной релаксацией по сравнению с U46619-предварительно контрактированными тканями (Рис.2). 2 B) (см. след внутри (Fig. 1С). В сосудах, лишенных эндотелия, релаксация к юглону была снижена после предварительного сокращения с U46619 (Рис.2). 2 C) и почти полностью ингибируется после предварительного сокращения с помощью KCl (максимальная релаксация 13,2 ± 4,1%) (рис.2в). 2 г).

А) логарифмические концентрационно–ответные кривые для вазорелаксантных эффектов юглона по сравнению с контролем (ДМСО) в сегментах свиной коронарной артерии. B) логарифмические кривые концентрации-реакции для вазорелаксантных эффектов юглона после предварительного сокращения с U46619 или KCl (30 мм) в сегментах свиной коронарной артерии. С) логарифмические кривые концентрации-реакции для вазорелаксантных эффектов юглона после предварительного сокращения с U46619 в сосудах, лишенных эндотелия, по сравнению с интактными сосудами эндотелия. (D) Log концентрационно-ответные кривые для вазорелаксантных эффектов юглона после предварительного сокращения с U46619 или KCl в сосудах, лишенных эндотелия. Данные выражены в виде процентного изменения от U46619 и KCl-индуцированного сокращения и являются средними ± S. E. M. 6 экспериментов. Где * p < 0,05, * * P < 0,01 и * * * P (2-way ANOVA с последующим бонферрони post-hoc тестом).

3.2. Джуглон индуцирует релаксацию через no / cGMP путь в кольцах PCAs

Азотоводородный путь окиси и Цикло-оксигеназы имеет существенную роль в вазорелаксации эндотелия зависимой. Предварительная обработка ингибитором синтазы оксида азота L-NAME (300 мкм) значительно снижала реакцию вазорелаксации на юглон (65,5 ± 1,5% при 30 мкм юглона) по сравнению с контролем ( 93,0 ± 3,1%) (Рис.2). 3 а). Релаксантные реакции на юглон не претерпевали существенных изменений в присутствии индометацина (10 мкм) в кольцах Пкя ( Рис.1). 3 Б). Интересно, что хотя L-NAME сам по себе ингибировал релаксацию к юглону, комбинация индометацина и L-NAME не оказывала никакого эффекта ( Рис.2). 3С). С другой стороны, предварительная инкубация с ODQ, ингибитором гуанилилциклазы, действительно вызывала небольшое ингибирование релаксации юглона, которое не наблюдалось в сосудах, лишенных эндотелия ( Рис.2). 3 D и E).

3. Войдите концентрация–реакция кривых сосудорасширяющее действие юглон (а) в отсутствие или присутствии л-наименование (300 мкм), (Б) в отсутствие или в присутствии индометацина (10 мкм), (С) в отсутствие и в присутствии комбинации л-наименование (300 мкм) и индометацином (10 мкм), (Д & Е) и в отсутствие или наличие адррес odq (10 мкм), интактных (D) и зачищен ткани (е). Данные выражены в виде процентного изменения от u46619-индуцированного сокращения и являются средними ± S. E. M. из 6 экспериментов * * P < 0,01 и * * * P (2-way ANOVA с последующим бонферрони post-hoc тестом).

3.3. Влияние блокаторов калиевых каналов на вазорелаксантное действие юглона

Неселективный блокатор к + - каналов TEA (10 мм) не оказывал влияния на релаксационный ответ к юглону ни в интактных, ни в эндотелиально-ободранных кровеносных сосудах ( Рис.2). 4 а). Аналогично, ингибитор 4-АП канала КВ (1 мм) также не оказывал влияния на релаксационный ответ на юглон ни в интактных, ни в обнаженных сосудах эндотелия ( Рис.2). 4 Б).

4. Log концентрационно-ответные кривые для вазорелаксантных эффектов юглона в отсутствие или присутствии чая (10 мм) (а) и 4-АП (1 мм) (Б), как интактных, так и оголенных Пкя по сравнению с контролем. Данные выражены в виде процентного изменения от u46619-индуцированного сокращения и являются средними ± S. E. M. 6 экспериментов. (2-way ANOVA с последующим бонферрони post-hoc тестом).

3.4. Влияние юглона на кальцийиндуцированные сокращения

Добавление CaCl 2 (10 -7 - 10 -2 м) вызывала сократительную реакцию в сегментах Пкяс, предварительно сокращенных либо 60 мм KCl ( рис. 5 А) или U46619 ( рис. 5 Б). Этот ответ был ингибирован в тканях, предварительно инкубированных с юглоном (30 мкм).

5. Log концентрационно-ответные кривые для кальцийиндуцированных сокращений в сегментах ПКА, предварительно сокращенных с KCl (A) или U46619 (B) в бескальциевом буфере Кребса, предварительно инкубированном с юглоном (30 мкм) по сравнению с контролем транспортного средства. (C & D) логарифмические кривые концентрации–ответа к заливу K8644, предварительно обработанному юглоном (30 мкм) по сравнению с контролем транспортного средства в эндотелии-интактных (C) и-обнаженных (D) тканях. E) логарифмические кривые концентрации-реакции на залив K8644 в ПК, предварительно обработанных юглоном (30 мкм) или 300 мкм L- Имя/Juglone в комбинации по сравнению с управлением корабля. Данные выражены в виде изменения тонуса в граммах силы и составляют в среднем ± S. E. M. из 6 опытов. *** P (2-way ANOVA с последующим бонферрони post-hoc тестом).

Аналогично предварительная инкубация с юглоном ингибировала сужение до вольтаж-закрытого кальциевого канала открывателя залива К8644 в обоих эндотелий-интактных (Рис.2). 5 В) и эндотелий-оголенный ( рис. 5 г) сосуды. В другой серии экспериментов комбинация L-NAME с джуглоном не имела дальнейшего эффекта по сравнению с одним только джуглоном ( Рис.2). 5 е).