Фиксация материала – это процесс закрепления бактерий на предметном стекле во избежание их смывания при последующей окраске. Процесс фиксации сопровождается еще и умерщвлением бактерий, что значительно повышает эффективность окраски.
Применяют физическую или химическую фиксацию.
I. Физическая. Самый простой и распространенный способ - фиксация жаром. Держа стекло мазком вверх, его трижды проводят через пламя газовой или спиртовой горелки. Во избежание перегрева препарата время фиксации не должно превышать 5-6 с, время прямого воздействия пламени - 2 с.
II. Химическая. Для этого чаще используются:
1. Этиловый 95% спирт. Время фиксации 10-15 мин.
В меру доступный фиксатор. Спирт нужен чистый медицинский. Летуч, горюч.
2. Смесь равных объемов абсолютного спирта и диэтилового эфира (смесь Никифорова) - 10-15 мин.
Диэтиловый эфир – прекурсор, достать проблематично. Сильно летуч и горюч.
3. Метиловый спирт - 2-3 мин.
Относится к особо ядовитым веществам, оборот ограничен. Горюч.
4. Ацетон - 5 мин.
Это не ацетон из строительного магазина. Вернее это он, но не того качества. Нужен чистый ацетон. В таком очищенном виде он прекурсор, достать проблематично. Летуч, горюч.
5. Раствор сулемы 1% - 10-15 мин, с дальнейшим промыванием водой.
Сулема, или хлорид ртути, относится к особо ядовитым веществам, оборот ограничен. К тому же довольно дорогостоящий компонент.
6. Раствор AgNO3 10% - 10 мин.
Нитрат серебра - дорогой реактив.
7. Жидкость Буэна: смесь формалина, ледяной уксусной кислоты и насыщенного водного раствора пикриновой кислоты.
Формалин в меру ядовит, ледяная уксусная кислота – прекурсор, пикриновая кислота взрывоопасна при определенных условиях. Ледяная означает концентрированная, практически абсолютная. Пищевая уксусная кислота всего 70%, а все что свыше – уже считается прекурсором.
8. Жидкость Карнуа: смесь ледяной уксусной кислоты, хлороформа и 96% спирта.
Ледяная уксусная кислота – прекурсор, хлороформ – ядовит (сильнодействующее вещество, ранее использовался для наркоза, летуч).
Большинство этих веществ не безопасны при работе: они летучи/горючи/ядовиты. Поэтому строго соблюдаем технику безопасности! Это работа вдали от источников воспламенения, хорошая вентиляция, перчатки.
На практике чаще всего прибегают именно к физической фиксации. Это удобно, безопасно и экономично. Но не всегда она применима. Определенные методики окраски требуют именно определенной химической фиксации.