Евгений Брусенцев

Добавление факторов роста в культуральную среду может оказывать стимулирующее влияние на развитие эмбрионов различных видов млекопитающих и повышать частоту имплантации эмбрионов. По своему химическому составу все факторы роста являются пептидами либо небольшими молекулами глобулярных белков, которые можно отнести к цитокинам или гормонам. Большинство факторов роста относится к цитокинам. Это пептиды и низкомолекулярные белки, которые регулируют различные взаимодействия между клетками организма, как в норме, так и при различных патологиях...

При культивировании эмбрионов млекопитающих необходимо учитывать видовую специфику. Существенные различия наблюдаются при культивировании зародышей даже таких близкородственных видов лабораторных животных, как мыши, крысы и хомячки. Для работы с эмбрионами мышей часто применяют такие среды, как BWW (среда для культивирования преимплантационных эмбрионов, названную по первым буквам ее создателей Biggers, Whitten и Whittingham), М-16, среда 199, KSOM, хотя эмбрионы мыши способны развиваться и во многих других средах...

Выделяют три типа питательных сред по способу получения и составу используемых для этого компонентов: естественные, полусинтетические и синтетические. Важными свойствами любой питательной среды являются: постоянство рН (буферная емкость), осмолярность и стерильность. Для нормального развития преимплантационного эмбриона in vitro необходимо поддерживать pH в интервале от 7.2 до 7.4; содержание эндотоксинов не должно превышать нормы (не более 0.25 ЕЭ/мл); раствор должен быть изотоничным жидкости яйцевода; в нем должны отсутствовать патогены...

Культивирование in vitro гамет и преимплантационных эмбрионов млекопитающих является основой современных РТ, таких как ЭКО, создание банков (криобанков) генетических ресурсов и многих других. Хотя исследования в этой области проводятся достаточно давно, до сих пор многие вопросы относительно влияния оплодотворения in vitro и последующего культивирования на развитие эмбриона и фенотипические признаки в постнатальном онтогенезе остаются неясными. После рождения первого ребенка, зачатого в результате ЭКО, прошло уже 45 лет, а общее число детей, рожденных с применением РТ, достигло 10 миллионов...

При замораживании преимплантационных эмбрионов и гамет различных видов лабораторных животных могут возникать всевозможные трудности. Наиболее полно и надежно процедуры, связанные с криоконсервацией эмбрионов и гамет, а также последующим получением живых потомков отработаны на мышах. С некоторыми модификациями, эти протоколы позволяют криоконсервировать преимплантационные эмбрионы и других видов лабораторных грызунов, таких, как крысы. При попытках создания криобанков других представителей животного царства, не относящихся к классу млекопитающих, возникают иногда более серьезные проблемы...

Создание криобанка преимплантационных зародышей является традиционным способом сохранения генетических ресурсов различных линий мышей; лишь несколько позже, наряду с эмбрионами, для сохранения генетических ресурсов мышей стали применять и замороженное семя. Следует отметить, что при создании криобанков лабораторных животных, криоконсервация гамет обычно дополняет, но не заменяет криоконсервацию эмбрионов. Была разработана математическая модель создания криобанков, исходя из таких приоритетов, как надежность сохранения генетического материала, оптимальная стоимость криобанка и другие...

Экспериментально было показано, что можно успешно трансплантировать яичниковую ткань мышей соответствующим реципиентам того, как до, так и после криоконсервации. Таким образом, трансплантация яичниковой ткани с последующей трансплантацией иммунодефицитным реципиентам другой линии или даже другого вида, либо генетически идентичным реципиентам той же линии является перспективным подходом к сохранению генетических ресурсов мышей, особенно при сохранении трансгенных линий, имеющих репродуктивные проблемы...

Криоконсервация женских гамет большинства видов млекопитающих, в отличие от замораживания сперматозоидов и эмбрионов, до сих пор связана с большими сложностями. Поэтому генетические ресурсы лабораторных животных чаще сохраняют именно в виде замороженных эмбрионов или сперматозоидов, чем в виде ооцитов (яйцеклеток). Одна из основных проблем, возникающих при замораживании женских гамет, – затвердевание прозрачной оболочки (zona pellucida). Эта эластичная гликопротеиновая оболочка окружает яйцеклетку, отделяя ее от окружающей среды, и выполняет ряд жизненно важных функций...

Замораживание мужских гамет – сперматозоидов является одним из основных методов, применяемых для сохранения генетических ресурсов лабораторных мышей, а также крыс, собак, кошек, свиней и Danio rerio. После оттаивания замороженного семени, в том случае, если процент подвижных сперматозоидов в образце достаточно велик, можно получить зиготы и развивающиеся зародыши с применением процедуры ЭКО; последующая же трансплантация полученных in vitro зародышей позволяет восстановить ту или иную линию лабораторных мышей или крыс...

Биологический материал может храниться при сверхнизкой температуре –196 °С длительное время, не теряя своей жизнеспособности, поскольку при этой температуре метаболические процессы практически остановлены. Это теоретическое положение подтверждается на практике получением потомства из замороженных эмбрионов, находившихся в криобанке несколько десятков лет. Криобиология играет важную роль в сохранении генетических ресурсов различных животных, однако современное понимание криоконсервации основано на длительной истории экспериментальных исследований в физике, химии и биологии...

Криоконсервация эмбрионов и гамет широко используется для сохранения генетических ресурсов лабораторных, а также сельскохозяйственных, редких и исчезающих видов животных. Несмотря на то, что уже успешно заморожены эмбрионы и гаметы нескольких десятков видов млекопитающих, а криобанки генетических ресурсов стали рутинной практикой работы генетических центров до сих пор не существует единого универсального протокола замораживания и оттаивания эмбрионов даже для мышей. В некоторых генетических центрах,...

Расшифровка генома человека подняло на новый уровень поиск способов лечения различных болезней. Расшифрованы геномы и многих других видов животных, в том числе мыши, крысы, собаки, кошки, Danio rerio, свиньи и других. Эти достижения расширили возможность выбора соответствующих лабораторных животных для определения функций генов и тестирования новых терапевтических подходов. Мышь, в настоящее время, является, пожалуй, важнейшим и наиболее широко востребованным лабораторным животным. Однако при решении...