Продолжая тему макромицетов, захотелось хотя бы один их вид описать подробнее, и заодно добавить что-то новое, о чем обычно не пишут.
Поскольку прошлый год оказался для меня полон открытий в этой сфере, в связи с открытием нового лесного массива, почти не тронутого массовыми нашествиями горожанами. И в нем обнаружилось такое разнообразие как растений, так и лишайников, и конечно грибов! Если точнее, это та часть юго-западного леса Новой Москвы, которая пока еще не разделена надвигающимся Новомихайловским шоссе со стороны центра, упирающаяся, не считая просеки, в бетонку или ЦКАД, где они практически совпадают маршрутами. Самый интересный в этом смысле гриб для меня - Бледная поганка.
Дело в том, что, как оказалось, до прошлого года я не знала как она выглядит "в лицо". То есть конечно слышала о ней и представляла как какой-то тоненький белый, буквально бледный грибочек, который и если встретишь - не захочешь собирать. Оказалось все намного опаснее! И дело не в том, что я собралась ее собирать, а скорее в том ажиотаже, который творился в грибных темах других каналов здесь же на платформе, а также в других интернет-группах. Разнообразие возможных видов грибов росло для меня с каждым новым днем, с каждым походом в лес и посещением текстов, посвященных грибному разнообразию. После многочисленных советов внимательно разглядывать строение шляпки, ножку, крепление шляпки к ножке, обратную сторону шляпки, наличие юбочки, а также наличия сока ("молочка"), который может менять цвет на срезе (окисляясь на воздухе), я стала ходить в лес как на экскурсию, с ножичком, чтобы не сколько собрать какие-то грибы, сколько успеть найти и запечатлеть как можно больше новых для меня объектов в разном виде, разного "возраста" и нахождения на субстрате. И вот, зайдя в ту часть леса, в которую видимо ходит не так много грибников, из-за разрушения удобной переправы через болотце при дороге, и из-за близости к промзоне, я обнаружила, что грибы здесь выглядят немного иначе. Например, впервые встретила заплесневелые белые грибы, которые уже не было смысла брать, обнаружились новые места роста лисичек, валуев, сыроежек ввиду отсутствия четких троп и разреженного лиственными деревьями и пнями от них ельника.
Под одной из молодых елей, в полутьме из-за особенностей крон в этом месте, обнаружила гриб, как раз красующийся на фотографии в начале этого текста). Мне он показался красивым, складным, гладеньким и с интересным оттенком - и не зеленым, и не белым, с красивой ножкой, достаточно мясистый, поэтому стали возникать мысли, а не может ли это быть какой-то съедобный, но неизвестный мне гриб типа какого-то из паутинников. Рядом, очевидно, были они же, но в состоянии "малышей", проклевывающиеся грибочки, очень красивые, сквозь белое одеяльце нежно-зеленые "головки", оттенка, который даже трудно описать - настолько нежный, не то светло-травяной, не то желто-мятный, как сейчас любят называть такие оттенки.
Один из таких маленьких грибочков решила подрезать ножом и посмотреть какая там ножка. После этого, кажется, протерла лезвие об одежду, и уже позже нашла лисички, собирала их тем же ножом. Потом уже, придя домой и осознав через поиск по фотографии, что встретила ее самую, бледную лесную царевну, было много сомнений, что делать со всеми собранными грибами. Хотя они точно были съедобными, пришлось их помыть, почистить, особенно ножки, снова помыть, отварить, и даже потом была мысль все это вылить. Но в итоге стало обидно и какую-то часть все-таки использовала, все хорошо!
Позже, уже под Звенигородской биостанцией, встретила их еще раз, но уже не такие красивые:
После внимательно прочла о ее свойствах. Многим наверняка известных:
Этот вид грибов содержит в себе нерастворимые в воде токсины:
- Аманитины (аматоксины, аманитотоксины) — α-аманитин, β-аманитин, γ-аманитин.
- Фаллоидины (фаллотоксины) — фаллоин, фаллоидин, фаллин B, фаллацидин, фаллализин.
По воздействию на организм человека они отличаются тем, что фаллоидины действуют быстро, в течение нескольких часов, отсюда у человека, поевшего гриба, начинается тошнота, головокружение и прочие признаки отравления. При этом смертельная доза фаллоидинов для человека составляет 20–30 мг, а аматоксины действуют значительно позже, но их действие уже необратимо, поэтому при первых признаках отравления при подозрении на грибы необходимо срочно вызвать скорую помощь.
Более подробное действие на организм на сайте https://www.krasotaimedicina.ru/diseases/urgent/amanita-phalloides-poisoning медики описывают так:
- Аманитотоксины имеют специфический путь метаболизма в организме: около 60% поглощённых в кишечнике токсинов проходят через печень, откуда попадают в желчь и снова поступают в просвет кишки. Затем токсины могут повторно всасываться через кишечную стенку и проникать в гепатоциты по системе воротной вены.
- Фаллотоксины разрушаются под действием пищеварительных ферментов, поэтому действуют только на стенку кишечника и не попадают в системный кровоток. Вызывают некротические изменения эпителия кишечника, нарушают барьерную функцию ЖКТ и способствуют развитию бактериальной токсемии за счёт проникающих в кровь условно-патогенных представителей микрофлоры.
(1. Токсическое действие ядовитых веществ, содержащихся в съеденных грибах. Клинические рекомендации Общероссийской общественной организации «Ассоциация клинических токсикологов». – 2020.
2. Фаллоидиновый синдром: актуальные направления токсикокинетической и токсикодинамической терапии/ А.А. Ховпачев, В.А. Башарин, С.В. Чепур// Российский биомедицинский журнал. – 2020. – №21.
3. Медицинская токсикология: Национальное руководство/ под ред. Е.А. Лужникова. – 2012.
4. Морфологическая оценка острых отравлений бледной поганкой/ Амелехина О.Е., Бабаханян Р.В., Сафрай А.Е.// Нефрология. – 2004.)
Вопрос о том откуда же у этих грибов столько опасные для человека и животных кстати тоже (собак, а особенно кошек) токсины остается открытым. Как будто конкуренции они не боятся, даже наоборот - с потеплением климата ареал их стал перемещаться в более северные широты, и если раньше для Ленинградской области он был очень редким, то сейчас стал встречаться значительно чаще, не говоря уже о Подмосковье, где для него полное раздолье.
Недавно ученые открыли, что Бледная поганка ведет себя в каком-то смысле как сорняк, распространяясь по планете, например, на западном побережье США, в Калифорнии, где является инвазивным видом. Вид может распространяться как вегетативно, так и спорами, причем для этого им необязательно оплодотворение, то есть они могут быть так называемыми однополыми с материнским грибом. Самый старый гриб (мицелий), обнаруженный ими, составил 35 лет. А одна особь гриба, имеющая один и тот же генотип, располагалась на участке до 10 м в диаметре.
"Даже на участках с более старыми популяциями (Джейкс-Лэндинг, возраст которой составляет не менее 35 лет, и Дрейк-2, возраст которой составляет не менее 11 лет), а также на участках, где сбор образцов проводился в течение всего сезона (CESAC), для особей характерен устойчивый комплекс, состоящий из множества одиночных особей и генетических групп, образованных скоплениями грибов, растущих рядом друг с другом. Сохранение этого комплекса на разных континентах и в разные периоды времени указывает на наличие эфемерных особей, которые могут или вынуждены завершать свой жизненный цикл за очень короткий промежуток времени, возможно, даже за один год. Мы наблюдаем, что межвидовые взаимодействия играют роль в формировании продолжительности жизни A. phalloides. Примечательно, что функция токсичности этого вида неизвестна, но недавно мы обнаружили, что гены токсинов подвергаются сильному естественному отбору (Drott et al., 2023), а эволюционная динамика предполагает, что токсичность опосредует критические взаимодействия с конкурентами, хищниками или болезнями."
(Golan, J., Wang, Y.-W., Adams, C.A., Cross, H., Elmore, H., Gardes, M., Gonçalves, S.C., Hess, J., Richard, F., Wolfe, B. and Pringle, A. (2024), Death caps (Amanita phalloides) frequently establish from sexual spores, but individuals can grow large and live for more than a decade in invaded forests. New Phytol, 242: 1753-1770. https://doi.org/10.1111/nph.19483)
Также авторы сделали в своей статье интересный вывод, касающийся темы контроля численности макромицетов, в частности Бледной поганки:
"Наконец, наши результаты имеют очевидные последствия для борьбы с Бледной поганкой: сбор грибов не уничтожит их популяцию в среде обитания, потому что долгоживущий мицелий будет продолжать расселять почву и размножаться. Поскольку ни один из известных фунгицидов не сможет выборочно уничтожить Бледную поганку, единственным эффективным инструментом управления ее численности является предотвращение ее распространения."
В большинстве случаев распространение Бледной поганки связывают с транспортировкой саженцев деревьев, чаще всего каштанов.
Среди грибников есть мнение, что сбор краснокнижных (редких) грибов только способствует их распространению, но это не так. Редкость часто обусловлена сложностью условий их произрастания или плохой приспособляемостью к новым, и попытка распространить их искусственно, собирая и перевозя с места на место, совсем не обязательно будет способствовать увеличению их численности. А вот сокращение спороносящих плодовых тел может снизить их шансы на сохранение в ареале.
Чтобы не спутать Бледную поганку с другими грибами и в принципе узнать ее, нужно знать ряд особенностей ее строения:
- Шляпка диаметром 5–11 см, яйцевидно-колокольчатая (с возрастом плоско-выпуклая), бледно-зелёная или оливковая, к центру более тёмная, шелковистая, с гладким краем, свободными, обычно белыми пластинками.
- Ножка длиной 8–12 см, толщиной 1,5–2 см, белая или зеленоватая, с плёнчатым кольцом в верхней части, вздутая (клубнеобразная) у основания, с мешковидным влагалищем.
- Мякоть белая, со слабым запахом сырого картофеля (впрочем нюхать не советую!).
- На ранней стадии выглядит как белое яйцо.
(https://bigenc.ru/c/blednaia-poganka-c8100e)
Классифицируется Бледная поганка как представитель отдела Базидиомицеты (Basidiomycota), класса Агарикомицеты (Agaricomycetes), порядка Агариковые (Agaricales), семейства Мухомор (Amanitaceae), рода Мухомор (Amanita).
Первое научное описание Бледной поганки было сделано французским ботаником Себастьяном Вайаном в 1727 году. Название Amanita phalloides было принято в 1833 году немецким натуралистом Иоганном Генрихом Фридрихом Линком.
История этого вида также тянется из глубины веков, и первый случай отравления бледной поганкой был зафиксирован в семье древнегреческого драматурга Еврипида (480–406 г. до н.э.), когда она была спутана с деликатесным Цесарским грибом Amanita caesarea.
Существует легенда об отравлении Бледной поганкой императора Клавдия под видом того же сходства с Цесарским грибом в I веке нашей эры, однако многие историки эту версию отвергают, тем более ее уже невозможно доказать.
Способы обнаружения яда в грибе
1. Метод Мейкснера
Данный метод был описан в 1980 году. Общее содержание в переводе приведено ниже.
Были использованы три варианта методики тестирования:
1) Свежие образцы: на листе газетной бумаги карандашом были нарисованы круги диаметром 2,5 см. В центр каждого круга был наложен кусочек ткани от шапочки, а прилипшая ткань соскабливалась лезвием бритвы.
Пятна высушивали на воздухе при комнатной температуре, а затем на каждое пятно наносили по одной капле раствора концентрированной HCl. В качестве контроля использовали один круг на листе и получали только HCl. Появившийся цвет проверяли в течение 1 часа на предмет изменений. Листы были защищены от прямых солнечных лучей, поскольку интенсивный свет может способствовать образованию слабого синего оттенка в контрольном месте и ускорять выцветание синего соединения, образующегося в результате реакции аматоксин-лигнин.
2) Высушенные (гербарные) образцы: небольшой кусочек ткани с
края ножки (около 70 мг, или 1 квадратный см) помещали на часовое
стекло, смачивали 200-250 мл чистого метанола и измельчали
стеклянной палочкой. Затем жидкость наносили на газетную бумагу, высушивали и добавляли HCl, как описано выше, для свежих образцов.
3) Альтернативная процедура для высушенных образцов: для извлечения токсинов из образца использовали смесь метанола
и концентрированной HCl, а раствор наносили непосредственно на бумагу. Это быстрее, чем в предыдущем варианте, но раствор нельзя было использовать в дальнейшем для проверки наличия аматоксинов с помощью хроматографии.
В тех случаях, когда возникала неожиданная цветовая реакция, проводились параллельные тесты с использованием фильтровальной бумаги (которая не содержит лигнина), чтобы отличить истинные реакции теста Мейкснера от простых реакций окрашивания, катализируемых кислотой, или автоокислений.
Результаты испытаний были подтверждены методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) очищенных экстрактов тканей на силикагелевых пластинах G (Analtech, Inc.); модификации методик Андари и др. для анализа были использованы триптамины и аматоксины. Экстракция и очистка
образцов аматоксина была аналогична процедуре, использованной Йокумом и Саймонсом.
Результаты экспериментов показали, что стандартный а-аманитин, f3-аманитин и 'y-аманитин давали одинаковые светло-зеленовато-голубые пятна, которые появлялись в течение нескольких минут в зависимости от количества присутствующих токсинов. Пределы обнаружения составляли около 5 мкг на 25-дюймовое пятно, или 0,2 мг/мл. Стандартные фаллотоксины, такие как фаллоидин, фаллоин и фаллизин, не окрашивались.
Было протестировано несколько 5-замещенных триптаминов: буфотенин, 5-
гидрокситриптамин, 5-гидрокситриптофан, 5-метокситриптамин и 5-метокси-N,N-диметилтриптамин. 5-замещенные триптофаны немедленно придавали умеренный красновато-коричневый цвет, постепенно меняясь на серовато-пурпурно-красный, затем на умеренный красно-коричневый и, наконец, стремясь к тому же синему цвету, что и у аматоксинов. Пределы обнаружения этих триптаминов были примерно такими же, как и для аматоксинов. Незамещенные триптамины (N, N-диметилтриптамин, N-метилтриптамин и триптамин) не давали окрашивания.
Четырехзамещенные триптамины псилоцин и псилоцибин не
были доступны нам в качестве чистых образцов. Тесты с Psilocybe cyanescens
сначала дали серый цвет, но через минуту он стал серовато-голубым до бледно-голубого. Более низкие концентрации давали светло-зеленовато-голубой цвет. Цветовая реакция отличалась от реакции с аманитином по серому оттенку, а также по тому, что цвет исчезал быстрее.
Хотя участвующая в этом химическая реакция не была описана, проверка модельных соединений, давшая положительный результат по тесту Мейкснера, показала, что индольное ядро, замещенное кислородом (гидрокси- или метокси-), является структурным требованием. 6-гидроксииндольное кольцо присутствует в некоторых аматоксинах (аманитинах), но отсутствует в других, таких как аманин и аманинамид. Ожидается, что тест Мейкснера не даст
положительного результата в отношении последней группы. Из этого, конечно, следует, что отрицательный тест Мейкснера никогда не может рассматриваться как доказательство съедобности того или иного вида грибов.
Тест также не выявляет такие потенциально токсичные грибковые метаболиты, как гиромитрин, коприн, мускарин или иботеновая кислота.
Поскольку при окислении лигнина образуется ванилин, первоначально предполагалось, что сначала образуется ванилин, а затем он вступает в реакцию с индолом. Однако образец ванилина, нанесенный на фильтровальную бумагу,
был высушен и покрыт сначала а-аманитином, а затем концентрированной НСl не давал синего цвета. Различные образцы газетной бумаги показали разную
чувствительность.
ТСХ показала, что красно-синяя цветовая реакция, наблюдаемая в
Тест Мейкснера на A. citrina и A. porphyria был вызван, соответственно,
буфотенином и 5-гидрокситриптофаном. Концентрация буфотенина
в A. citrina составляла 0,4-7,5 мг/г сухого веса; концентрация 5-гидрокситриптофана в A. porphyria составляла 2,2-5,1 мг/г. Оба вида также
содержали незначительные количества 5-гидрокситриптамина.
Красно-синяя реакция у Lepiota cepaestipes была вызвана не этими
триптаминами или другими, доступными для сравнения.
Исследование образцов методом ТСХ, давшее реакцию синего цвета, характерную для аманитинов, подтвердило, что во всех случаях присутствовали значительные количества аманитинов. Стоит отметить два момента: Один экземпляр Lepiota helveola из коллекции (Roger W. Bland) дал положительный результат по тесту Мейкснера и в нем с помощью ТСХ был обнаружено содержание 0,56 мг/г a-аманитина и 0,15 мг/г y-аманитина (на сухой вес). I-аманитин не был обнаружен. Это первое сообщение о появлении этих токсинов у американского вида Lepiota, подтверждающее результаты, полученные французскими исследователями в отношении европейских видов. Второй экземпляр, возрастом 12-14 лет, не прошел четкий тест Мейкснера, но в нем также было обнаружено 0,14 и 0,02 мг/г сухого веса a- и y-аманитина методом ТСХ. Это свидетельствует о том, что данный уровень аманитинов близок к пределу обнаружения с помощью теста Мейкснера.
Значительные различия были обнаружены у Amanita virosa (Белая поганка). Примерно у половины исследованных образцов как тест Мейкснера, так и ТСХ-анализ показали наличие аманитинов. В остальных случаях как тест Мейкснера, так и ТСХ показали отсутствие аманитинов. Это изменение в структуре токсинов уже отмечалось, но тест Мейкснера обеспечивает быстрое и удобное тестирование в гораздо более широком масштабе, чем раньше.
ТСХ показал, что фаллотоксины (фаллоидин) присутствуют во всех видах A. virosa независимо от наличия или отсутствия аматоксинов.
И самое главное - результаты непосредственно по Бледной поганке:
Были проведены обширные испытания на 200 отдельных представителях
Amanita phalloides, собранных 1 декабря 1979 года в штате Томалес-Бей.
Парк Марин Колорадо, Калифорния, связан с сельскохозяйственными культурами дубов Quercus agrifolia Nee и Q. chrysolepis Liebm. Все образцы, кроме одного, дали положительный результат по тесту Мейкснера, а анализ методом ТСХ этого отрицательного образца (PPV #42167) не выявил обнаруживаемых аматоксинов или фаллотоксинов.
Положительные реакции были от легких до умеренных сине-зеленых до
ярких или ярко выраженных зеленовато-синих. Некоторые образцы имели
различную окраску, что, вероятно, было связано с различными
уровнями и/или структурой токсина или с другими соединениями. Наш
анализ методом ТСХ различных образцов восточного вида A. phalloides показал именно такие различия в уровнях токсинов и их структуре. Однако ни один экземпляр A. phalloides, собранный в восточной части Северной Америки, еще не продемонстрировал полного сходства.
Несколько других видов грибов давали другие цветовые реакции в
Тест Мейкснера, но большинство из них можно сгруппировать под названием
"автоокисление". Виды, которые при прикосновении оставляют "синяки", или виды Lactarius, которые меняют цвет под воздействием воздуха, при обработке HCl оставляют цветные пятна как на газетной, так и на фильтровальной бумаге. Поскольку фильтровальная бумага не содержит лигнина, эти реакции нельзя рассматривать как настоящие реакции Мейкснера.
Мы считаем, что, несмотря на некоторые присущие грибам ограничения, тест Мейкснера является отличным инструментом для выявления аманитинов и
триптаминов, замещающих кислород, в грибах. Функция 6-гидроксииндола является относительно редкой в натуральных продуктах, и ложных срабатываний точно такого же синего цвета должно быть очень мало. Надлежащий контроль - например, использование бумаги, не содержащей лигнина, - может помочь исключить другие ложные цветовые реакции.
Простота и чувствительность теста облегчают быстрое проведение крупномасштабного скрининга как в лаборатории, так и в полевых условиях. Этот тест, по-видимому, идеально подходит для изучения изменения содержания токсинов с возрастом в живых образцах in situ, поскольку ущерб, причиняемый удалением небольшого количества тканей, необходимых для проведения теста, вряд ли превысит тот, которому в природе подвержены представители собираемых в качестве экспериментальных образцов грибов.
Результаты эксперимента можно посмотреть в таблице 1 на пятой странице статьи.
Авторы хотели бы подчеркнуть тот факт, что отрицательный тест Мейкснера не является доказательством съедобности грибов!
2. Жидкостная хроматография высокого разрешения (ЖХВР)
Не буду ударяться в подробности метода, о нем можно почитать в справочниках и методичках. Этот метод позволяет количественно определять альфа- и бета-аманитины в плазме, моче, гастродуоденальном соке, фекалиях и тканях. Предел обнаружения составляет 5 нг/мл для обоих соединений.
3. Высокоэффективная тонкослойная хроматография (HP-TLC).
Метод характеризуется коротким временем анализа (1–2 часа), эффективностью обнаружения альфа- и бета-аманитинов в высоком диапазоне концентраций (более 100 нг/пятно), а также отсутствием ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
4. Иммуноферментный анализ (ИФА)
В 2020 году был разработан иммуноферментный анализ латерального потока на основе моноклональных антител, который позволяет быстро и избирательно обнаруживать аматоксины. Такой тест чувствительно выявляет альфа-аманитин и гамма-аманитин (с чувствительностью 10 нг/мл), несколько хуже — бета-аманитин. При этом тест может перекрестно реагировать с фаллотоксинами, но такие случаи редки.
Итак, на этом тему удивительного и страшного гриба Бледная поганка можно прикрыть, но его необычные свойства и пока необъяснимые по сей день механизмы эволюционного развития говорят о том, что он еще сможет поведать научному миру много нового, и, вероятно, полезного!