Иммерсионный объектив — это объектив микроскопа, предназначенный для работы с иммерсионной жидкостью (обычно специальным маслом), которая помещается между фронтальной линзой объектива и покровным стеклом препарата. Это позволяет значительно увеличить числовую апертуру и разрешение.
Почему используется иммерсионное масло
Воздух имеет показатель преломления n=1,0. При переходе света из стекла препарата (n≈1,52) в воздух происходит преломление, которое ограничивает угол сбора света объективом. Иммерсионное масло имеет показатель преломления, близкий к стеклу (n≈1,515), что устраняет эту границу раздела и позволяет объективу собирать свет под значительно большим углом.
Числовая апертура и разрешение
Иммерсионные объективы достигают NA = 1,25–1,45 (против максимума 0,95 для сухих объективов). Это позволяет разрешать объекты размером около 200 нм — предел светового микроскопа. Объектив 100×/1,25 Oil — стандартный иммерсионный объектив для работы с бактериями, клеточными ядрами и хромосомами.
Как работать с иммерсионным объективом
- Нанесите небольшую каплю иммерсионного масла (1–2 мкл) на покровное стекло препарата.
- Осторожно опустите объектив до касания с масляной каплей. Убедитесь, что масло заполнило пространство без пузырьков.
- Сфокусируйтесь микрометрическим винтом.
- После работы немедленно очистите объектив специальной бумагой или ватным тампоном, смоченным спиртом или ксилолом. Оставшееся масло затвердевает и повреждает линзу.
Типы иммерсионных сред
Иммерсионное масло — наиболее распространённая среда, стандартна для светового микроскопа.
Водная иммерсия — специальные объективы с n=1,33 для живых клеток в водной среде.
Глицериновая иммерсия — для флуоресцентной микроскопии.