В фильме «Первый Мститель: Противостояние» (2016) впервые появился Человек-паук в рамках КВМ, режиссерами выступили Энтони и Джо Руссо. После того, как Marvel Studios и Sony Pictures достигли соглашения о разделе прав, начались поиски нового Питера Паркера.
Среди актеров, которые, как сообщалось, проходили пробы или серьезно рассматривались на роли, были Том Холланд, Эйса Баттерфилд, Чарли Роу, Мэттью Линц и Нат Вулф. В итоге роль досталась Тому Холланду после нескольких кинопроб, включая пробы на совместимость с Робертом Дауни-младшим, поскольку Marvel отдала предпочтение его возрасту, физической форме, а также танцевальной и гимнастической подготовке.
Человек-паук в исполнении Холланда дебютировал как второстепенный персонаж в более масштабном конфликте между Стивом Роджерсом и Тони Старком. По сюжету его костюм был разработан Старком, что позволило использовать выразительные линзы для глаз и расширенные функции костюма. Съемки сцен с Человеком-пауком проходили в основном на студии Pinewood Studios в Атланте в 2015 году, при этом Холланд снимал большую часть своего материала отдельно, чтобы избежать утечки сюжета. Технология захвата движений и компьютерная графика широко использовались, особенно для движений и боевых сцен Человека-паука в аэропорту.
«Противостояние» вышло в прокат 6 мая 2016 года после сильного ажиотажа, вызванного внутренним расколом в команде Мстителей и возвращением Человека-паука в Marvel Studios. В первые выходные фильм собрал около 179,1 миллиона долларов в США. В Северной Америке он заработал около 408 миллионов долларов, а во всем мире — примерно 1,15 миллиарда долларов, став на тот момент самым кассовым фильмом 2016 года в мировом прокате. Появление Человека-паука широко отмечалось как ключевой фактор в маркетинге фильма и привлечении внимания зрителей.