Фенотипические методы идентификации Streptococcus pneumoniae. Чувствительность к оптохину.
Идентификация S. pneumoniae проводится стандартными фенотипическими методами, основными из которых являются чувствительность к оптохину и лизис в присутствии солей желчи.
Чувствительность к оптохину.
Принцип. Метод основан на способности оптохина селективно подавлять рост пневмококка в отличие от других зеленящих стрептококков.
Материалы:
1) агар с добавлением 5% дефибринированной крови;
2) диски, содержащие 5 мкг оптохина.
Процедура. Произвести посев 1 колонии α гемолитического стрептококка, подозрительного по морфологии на пневмококк, штрихом на сектор КА. Поместить диск с оптохином на засеянную поверхность и инкубировать в течение 18–24 ч при температуре 35⁰С в атмосфере с 5–7% СО2 .
Интерпретация результата.
Зона задержки роста ≥14 мм (диск диаметром 6 мм) или ≥16мм (диск диаметром 10 мм) свидетельствует о наличии S. pneumoniae. Зона задержки роста <14 (<16мм) требует подтверждения испытуемой культуры на принадлежность к S.pneumoniae в тесте лизиса в присутствии солей желчных кислот.
Ограничения метода. Примерно 4–5% пневмококков резистентны к оптохину, а рост некоторых “зеленящих” стрептококков подавляется оптохином (с образованием узкой зоны задержки роста).
Контроль качества.
Цель: контроль качества дисков с оптохином. Контрольные штаммы: положительный контроль S. pneumoniae ATCC 49619, отрицательный контроль– S. salivarius ATCC 13419 (или любой зеленящий стрептококк). Методика постановки и интерпретация результатов соответствует описанной выше.
На фото: тест с оптохином S.pneumoniae на кровяном агаре.
