Всем добрый день! Продолжаем тему иммунодиагностических реакций. Сегодня разберем реакции лизиса и реакции с использованием меченных реагентов. Повторюсь, что классификаций очень много. Я использовала классификацию, взятую из учебника Зверева В.В. и Бойченко М.Н. Основы микробиологии и иммунологии, так как мне она понятна.
Реакции, которые сегодня приведены в статье имеют огромную популярность, так как это быстро, красочно и достоверно. Но принцип у всех один и тот же: антиген+антитело=реакция. Просто разные формы подачи, реагентов и т.д.
Немного терминологии.
Иммунодиагностические реакции - это реакции, основанные на механизме взаимодействия антител и антигенов, применяемые на этапах лабораторного анализа проб абсолютно разного происхождения, будь то биологический материал или пробы с объектов внешней среды. Прочность связи между антителами и антигенами при образовании иммунного комплекса обусловлена пространственным соответствием активного центра антитела и эпитопа антигена (комплементарность антитела соответствующему антигену ).
Цель иммунодиагностических реакций:
1) для определения с помощью специфических иммунных сывороток вида или типа микроба выделенного от больного, носителя или из объектов внешней среды;
2) для обнаружения с помощью диагностикумов антител в сыворотке больных или реконвалесцентов;
3) для выявления с помощью аллергенов перестройки организма, возникающей при некоторых инфекционных заболеваниях.
РЕАКЦИИ ЛИЗИСА
Реакция связывания комплемента
Реакции лизиса основаны на способности комплемента вызывать цитолиз по
классическому пути. Пример -реакция связывания комплемента (РСК). Реакцию проводят в два этапа. На первом этапе АТ взаимодействуют с АГ и комплементом, на втором этапе добавляют индикатор - гемолитическую систему (смесь эритроцитов и антиэритроцитарной сыворотки). При положительном результате на первом этапе АТ образуют с АГ иммунный
комплекс, связывающий комплемент реакционной смеси. В этом случае эритроциты гемолитической системы, добавленные на втором этапе, не разрушаются. В противном случае несвязанный комплемент вызывает лизис индикаторных эритроцитов.
РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифилиса (реакция Вассермана). РСК можно применять для определения антигена, например, вируса. В этом случае в качестве антител применяется диагностическая иммунная сыворотка.
В качестве комплемента для РСК применяется сыворотка крови морской свинки. Гемолитическую сыворотку получают из крови кроликов, иммунизированных эритроцитами барана.
Реакция биологической нейтрализации
Реакция биологической нейтрализации основана на способности АТ блокировать повреждающее действие микроорганизмов или токсинов. Если АТ связываются с микроорганизмом или токсином и нейтрализуют его действие, живые тест-объекты (животные, эмбрионы птиц, культуры клеток) не погибают.
Реакции нейтрализации широко применяют в вирусологической практике для серологической диагностики вирусных заболеваний и идентификации вирусов.
РЕАКЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕЧЕНЫХ РЕАГЕНТОВ
К реакциям с использованием меченых реагентов относят реакцию
иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ, радиоиммунный анализ,
иммуноблоттинг.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) (метод Кунса)
Она основана на использовании АТ, меченных флюорохромами - веществами, светящимися в УФ. Результаты оценивают с помощью люминесцентного микроскопа. Метод позволяет выявлять как бактериальные АГ, так и АТ и применяется для экспресс-диагностики. Различают прямой и непрямой методы
РИФ. При прямом методе неизвестный АГ (микроорганизмы, клетки) напрямую
взаимодействует с мечеными АТ. В случае положительного результата наблюдается свечение АГ. Непрямой метод РИФ проводят в два этапа. На первом этапе известный АГ взаимодействует с искомыми АТ, на втором - образовавшиеся иммунные комплексы проявляют с помощью меченой антииммуноглобулиновой сыворотки. Результаты оценивают, как и в случае прямого варианта.
Диагностика инфекционных заболеваний (например, при ВИЧ-инфекции, вирусов простого герпеса, цитомегаловируса). Исследование онкологических заболеваний. Обнаружение бактерий, которые с трудом поддаются культивированию.
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Один из наиболее распространенных методов, используемый в микробиологической и иммунологической диагностике. Модификаций ИФА существует очень много, но широко используется его твердофазный неконкурентный вариант. В реакции используют специфические АТ, меченные ферментом. Проявляют реакцию, добавляя субстрат для фермента, а затем - краситель-хромоген. При положительной реакции наблюдается изменение цвета реакционной смеси.
Иммуноферментный метод применяется для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных заболеваний, в частности диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др.
Радиоиммунологический анализ (РИА)
Основан на использовании меченных радиоактивными изотопами АГ или АТ. Количественное определение антител или антигенов, меченных радионуклидом, с применением аналогичных антител или антигенов: например, искомого антигена с применением иммунной сыворотки и аналогичного антигена, меченного радионуклидом. После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный комплекс антиген – антитело и определяют его радиоактивность по счетчику импульсов: количество меченого антигена, связавшегося с антителами, обратно пропорционально количеству искомого антигена. Широкое распространение получили так называемые прямой и непрямой варианты твердофазного радиоиммунологического метода, при которых используют полистиролевые плашки с адсорбированными антигенами или антителами. Метод применяют для выявления антигенов микроорганизмов, определения гормонов, ферментов, лекарственных веществ и иммуноглобулинов.
Широкое внедрение РИА затруднено из-за необходимости соблюдать правила работы с радиоактивным материалом.
Иммуноблоттинг
Иммуноблоттинг основан на сочетании электрофореза и ИФА (или РИФ, РИА).
Проводят разделение смеси АГ в электрофорезе, которые затем проявляют АТ, меченными ферментами, изотопами, флюорохромами.
Метод позволяет обнаружить антитела к отдельным антигенам вируса. Вообще широкий спектр применения от микробиологических до онкологических исследований.
В принципе темы довольно таки интересны, особенно, когда закончил учиться много лет назад. Теперь ты научился фильтровать и обрабатывать информацию вменяемо, а не как в универе в захлеб. Так что всему свое время)
Всем добра, удачных сдач и пересдач)
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ: Основы микробиологии и иммунологии Зверева В.В. и Бойченко М.Н.
Учебники по Микробиологии Воробьева А.В., Быкова А.С.
МИКРОБИОЛОГИЯ Л. М. Закарян.