Всем привет! В прошлой теме мы закончили рассматривать иммунодиагностические препараты. Тот или иной препарат используется в разных анализах, но вот механизмы и виды реакций, которые лежат в основе этих анализов, будет рассматриваться в этой статье. Опять же тема обширная, имеет разные варианты подачи информации, поэтому будет занимать несколько статей.
Я взяла источник информации тот, который понятен мне. Но это не значит, что все 100% правильно и надо опираться только на нее. Например, когда я училась в университете, лектор нёс одну информацию, мой непосредственно преподаватель на парах другую, а тот кто был на замене третью, а еще тот кто принимал отработки четвертую. Вот и получается дом советов, в котором студент, как ребенок получает "взрыв мозга". А потом вишенкой на торте, его еще и унизят, намекнув, что он не дотягивает до уровня. Правда я до сих пор так и не поняла, где был тот уровень.
Ну да ладно, мы немного отошли от темы.
Иммунодиагностические реакции - это реакции, основанные на механизме взаимодействия антител и антигенов, применяемые на этапах лабораторного анализа проб абсолютно разного происхождения, будь то биологический материал или пробы с объектов внешней среды. Прочность связи между антителами и антигенами при образовании иммунного комплекса обусловлена пространственным соответствием активного центра антитела и эпитопа антигена (комплементарность антитела соответствующему антигену ).
Цель иммунодиагностических реакций:
1) для определения с помощью специфических иммунных сывороток вида или типа микроба выделенного от больного, носителя или из объектов внешней среды;
2) для обнаружения с помощью диагностикумов антител в сыворотке больных или реконвалесцентов;
3) для выявления с помощью аллергенов перестройки организма, возникающей при некоторых инфекционных заболеваниях.
Существуют разные классификации иммунных реакций. Я, лично для себя, поняла классификацию, взятую из учебника Зверева В.В. и Бойченко М.Н. Основы микробиологии и иммунологии.
РЕАКЦИИ, СВЯЗАННЫЕ С ОБРАЗОВАНИЕМ МАКРОМОЛЕКУЛЯРНОГО
ИММУННОГО КОМПЛЕКСА
Реакции агглютинации (РА)
Реакция агглютинации (РА) - иммунная реакция взаимодействия суспензии АГ
(эритроцитов, бактерий) с АТ в физиологическом растворе. При агглютинации происходит склеивание частиц АТ с образованием хлопьевидного осадка.
Реакция протекает в две фазы. В первой фазе происходит специфическое присоединение антител к поверхности клетки, во второй - образование хлопьев в присутствии электролита (хлорида натрия). Видимая реакция происходит в том случае, если антитела имеют два активных центра, к каждому их них присоединяется антиген, и в результате образуется "решетка".
Реакцию агглютинации используют для определения антител в сыворотке крови больных, например при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), бруцеллезе (реакции Райта, Хеддлсона), туляремии и других инфекционных болезнях, а также для определения возбудителя, выделенного от больного. Эта же реакция применяется для определения групп крови. Реакция агглютинации имеет несколько разновидностей.
Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)
является разновидностью реакции агглютинации, в которой используют антительный или антигенный эритроцитарный диагностикум (эритроциты с адсорбированными на их поверхности АТ или АГ). Эритроциты
в этой реакции выполняют роль пассивных носителей.
Оценка результатов РПГА проводится следующим образом:
- при положительной реакции пассивно склеенные эритроциты покрывают дно U- или V-образной лунки ровным слоем с фестончатыми краями («зонтик»);
- при отрицательной реакции (отсутствии агглютинации) эритроциты скапливаются в центральном углублении лунки, образуя компактную «пуговку» с резко очерченными краями.
Реакцию применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать вирусы, которые в результате этого процесса теряют свойство агглютинировать эритроциты. Реакцию применяют в диагностике многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.
Реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА)
Реакция агглютинации для определения групп крови и резус-фактора. Антитела к резус-фактору эритроцитов являются неполными, поэтому, связываясь с эритроцитами, эти антитела не могут их агглютинировать. Для их выявления дополнительно в реакцию вводят антиглобулиновую сыворотку, содержащую антитела к иммуноглобулинам человека (реакция Кумбса). Антитела антиглобулиновой сыворотки, взаимодействуя с неполными антителами к резус-фактору, адсорбированными на эритроцитах, агглютинируют эритроциты. С помощью реакции Кумбса выявляют как антитела против резус-фактора, так и резус-фактор; диагностируют гемолитическую болезнь новорожденных, эритроциты которых соединяются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору.
Реакция преципитации
Реакция преципитации - иммунная реакция взаимодействия АГ в растворимом
состоянии с АТ в физиологическом растворе. При преципитации происходит образование макромолекулярного иммунного комплекса, что проявляется переходом прозрачного коллоидного раствора в непрозрачную суспензию, или преципитат. Количество обоих реагентов должно быть в строго определенных соотношениях, так как избыток одного из них снижает результат.
Реакция кольцепреципитации
Осадок комплекса антиген – антитело называется преципитатом. Реакцию ставят в пробирках нанесением (наслоением) раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата (реакция кольцепреципитации). Избыток антигена не влияет на результат реакции кольцепреципитации в результате постепенной диффузии реагентов к границе жидкостей.
Реакцию применяют в судебной медицине для определения видовой принадлежности белков в кровяных пятнах, в сперме и т.д. В санитарно-гигиенических исследованиях - для установления фальсификации пищевых продуктов. Если в качестве антигенов в реакции кольце-преципитации используют прокипяченные и профильтрованные водные экстракты органов и тканей, реакция носит название реакции термопреципитации (реакция Асколи).
Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони
Проводят в агаровом геле, в лунки которого вносят по схеме либо раствор АГ, либо раствор АТ. АГ и АТ диффундируют в гель навстречу друг другу и при положительном результате реакции образуют иммунные комплексы, видимые как линии преципитации.
Растопленный агаровый гель выливают в чашку Петри и после затвердения в нем вырезают лунки. В одни лунки помещают антиген, в другие - иммунные сыворотки, которые диффундируют в агар, образуют в месте встречи преципитат в виде белых полос.
Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют, в частности, для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента.
Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини
отличается от варианта реакции по Оухтерлони тем, что АТ добавляют в агаровый гель, а в лунки - раствор АГ. Последний диффундирует в агаровый гель, и при положительном результате образуется иммунный комплекс в виде кольца преципитации вокруг лунки. Диаметр кольца соответствует определенной концентрации искомого вещества.
Реакцию применяют, например, для определения в крови иммуноглобулинов различных классов. Иммуноглобулины классов IgG, IgM, IgA действуют в этой реакции как антигены, а антитела против них содержатся в специфических монорецепторных сыворотках.
Иммуноэлектрофорез
Иммуноэлектрофорез сочетает метод электрофореза и реакцию преципитации; смесь антигенов разделяют в геле с помощью электрофореза, затем параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте встречи с антигеном линии преципитации.
Метод используют для обнаружения антигенов в сложных физиологических смесях, например антигенов иммуноглобулинов. Также ИЭФ применяют для контроля подлинности и чистоты белковых препаратов.
Реакция флокуляции по Рамону
Разновидность реакции преципитации, которую используют для определения количества анатоксина. Расчет ведется в единицах начальной флокуляции по максимальной концентрации исследуемого вещества, дающей положительный результат (помутнение).
Принцип иммунодиагностических реакций, если своими словами. Просто антиген+антитело=видимый результат. Результат виден сразу или благодаря разным посредникам.
В принципе этой информации достаточно для переваривания. Нет смысла пихать больше, так как параллельно в студентов впихивается и другая информация, которая тоже важна. Я не говорю, что в универе преподают одни "вурдалаки".
Приведу пример. У меня на кафедре микробиологии тоже был классный лектор, которого ты понимал с полу слова. На парах у нас тоже вела, очень хорошая и добрая аспирантка, но я её не понимала вообще никак. А когда на замену приходили "одтельные кадры", то там за счет тебя прорабатывались свои комплексы неполноценности. Да, в медицине выживает сильнейший, но дело не в оскорблении и принижении тебя как личности. Да преподаватели ставили нам "неудовлетворительно", но это было заслужено. Потом ты шел и отрабатывал это. Но когда это делают, чтобы поглумиться, и я так думаю во всех медвузах страны, о каком интересе и жажде знаний идет речь?
Всем добра, удачных сдач и пересдач)
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ: Основы микробиологии и иммунологии Зверева В.В. и Бойченко М.Н.
Учебники по Микробиологии Воробьева А.В., Быкова А.С.
МИКРОБИОЛОГИЯ Л. М. Закарян.