1) Метод определения каталазной активности выявляет способность микроорганизмов синтезировать фермент каталазу. Он разлагает перекись водорода на воду и кислород. При добавлении H2O2 к культуре каталазоположительных бактерий происходит выделение пузырьков кислорода, как способ защиты от токсического действия перекиси водорода – побочного продукта аэробного метаболизма
2) Метод определения оксидазной активности позволяет выявить наличие у бактерий фермента цитохромоксидазы – ключевого компонента электрон-транспортной цепи в аэробном дыхании. Этот фермент участвует в переносе электронов на молекулярный кислород, превращая его в воду в электрон-транспортной цепи. Для определения присутствия фермента использовали оксидазные тест-полоски, в которые втерли петлей бактериальную массу. Цвет тест-полосок меняется при наличии цитохромоксидазы.
3) Метод определения нитратредуктазной активности используется для выявления способности микроорганизмов восстанавливать нитраты до нитритов. Использовали пептон жидкий 3%, после посева исследуемой культуры инкубировали 24 часа в термостате. Внесли 1 мл 0,1% KNO3, после 1 часа культивирования при 37ºС в пробирку добавили реактив Грисса 0,5 мл. При наличии нитритов в растворе происходит диазотирование сульфаниловой кислоты. Далее диазосоединение взаимодействует с альфа-нафтиламином, образуя азокраситель – ярко-розового или красно-фиолетового цвета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию нитритов. Такие микроорганизмы могут использовать нитраты как альтернативный акцептор электронов при дыхании в факультативно анаэробных условиях, а также участвуют в биогеохимических циклах.
4) Метод определения липолитической активности применяется для выявления способности микроорганизмов расщеплять липиды до жирных кислот и глицерина с помощью липаз – ферментов, которые катализируют гидролиз триглицеридов, фосфолипидов и других сложных липидов. При расщеплении жиров бактерии продуцируют жирные кислоты, которые могут приводят к образованию помутневших зон на плотных агаровых средах, содержащих твины (г/л): твин-80 (олеиновая кислота) – 10,0; пептон – 10,0; NaCl – 5; CaCl2*H2O – 0,1; агар – 20,0. На поверхность агаровой пластинки сделали посев микроорганизмов бактериальной петлей методом штриха. Инкубировали при 30°C в течение 24 часа.
5) Метод определения амилолитической активности для выявления способности микроорганизмов с помощью амилазы расщеплять крахмал. Этот фермент гидролизуют молекулу крахмала до более простых углеводов, таких как декстрины, мальтоза и глюкоза. Когда крахмал расщепляется, его место можно обнаружить с помощью йода, который образует с крахмалом синий комплекс. При расщеплении крахмала зона вокруг колонии может быть белой или прозрачной, так как амилоза не будут образовывать с йодом этот комплекс. Для теста на амилолитическую активность использовалась среда, содержащая крахмал (г/л): пептон – 10,0; KH2PO4 – 5,0; растворимый крахмал – 3,0; агар – 20,0.
6) Метод определения протеолитической активности используется для выявления способности микроорганизмов расщеплять белки с помощью ферментов протеаз. Эти ферменты катализируют разложение белков до пептидов и аминокислот. При протеолизе микроорганизмами происходит разрушение белковых молекул, что может проявляться в виде помутнения среды или образования прозрачных зон вокруг колоний на агаровых средах с белками. Микроорганизмы выращивали на среде, содержащей белок – казеин (г/л): 3% водный агар и равные части с обезжиренного молока.
7) Метод определения уреазной активности используется для выявления способности микроорганизмов расщеплять мочевину (карбамид) с образованием аммиака и углекислого газа с помощью фермента уреазы. Для теста использовали питательную среду, содержащую карбамид (г/л): K2HPO4 – 0,5; Na3C6H5O7 – 5,0; (NH2)2CO – 5,0. Мочевину вносят после автоклавирования. Положительная реакция проявляется в виде изменения цвета лакмусовой бумажки на синий.
Если вам понравилась эта статья, поделитесь ею с друзьями или в соцсетях — возможно, именно они сейчас ищут такой материал.
Напишите в комментариях, что было самым полезным, а также ваши пожелания и вопросы — нам действительно важно ваше мнение.
Подпишитесь на обновления, чтобы не пропустить новые статьи.
А ваш лайк — как аплодисменты после хорошего выступления, они вдохновляют нас работать ещё лучше!