Проводя доклинические испытания или эксперименты на модельных животных, как мыши, крысы, лягушки, ученые активно используют гистологические методы, для изучения морфологии тканей, или визуализации in vivo, для изучения процессов в органах.
Но что делать, когда изучить нужно не ткань или орган целиком, а отдельные клетки или изучить популяции клеток на уровне single cell mRNA-Seq? Как перейти с уровня изучения функций органов на уровень изучения процессов, протекающих в отдельных клетках?
Именно об этом и будет данный пост.
Не секрет, что клетки в составе ткани находятся в связанном состоянии, поэтому очень непросто их выковырять оттуда и еще сложнее сохранить их жизнеспособность. Особенно важно сохранить максимальную жизнеспособность, если требуется найти клетки из минорных популяций, слабо представленных в данном органе.
Классический метод получения суспензии первичных культур подразумевает механическое измельчение органа на мелкие кусочки, удаление лишних тканей и последующее воздействие протеолитическими ферментами (например, коллагеназами) на межклеточный матрикс.
Чаще всего, для разрушения межклеточного матрикса применяются различные типы коллагеназ, которые специфически расщепляют коллаген — основной структурный белок соединительной ткани. В зависимости от состава коллагенов, представленных в матриксе той или иной ткани, рекомендовано использование того или иного вида коллагеназ или их комбинации.
Полученную суспензию процеживают через сито, отмывают от ферментов и используют по назначению (культивируют или изучают).
Основные проблемы ручного метода:
- низкая эффективность и низкий выход живых клеток: эффективность метода будет зависеть от того, как мелко измельчили орган, температуры среды и концентрации фермента. При этом при малейшем отклонении, клетки под воздействием ферментов очень быстро гибнут;
- большие затраты ручного труда и риск влияния человеческого фактора: каждый этап требует участия оператора; малейшая ошибка может существенно снизить выход живых клеток;
- низкая воспроизводимость метода и сложность стандартизации: от раза к разу выход живых клеток будет существенно варьировать, поскольку на результат будет влиять множество факторов: от того как мелко порезали ткань, до активности ферментов.
Техническое решение: диссоциаторы клеток DSC.
Диссоциаторы клеток — это современные инструменты, которые позволяют решить все перечисленные проблемы. Они обеспечивают:
- высокий выход живых клеток,
- стандартизацию процесса,
- минимальное влияние человеческого фактора.
Компания RWD представляет диссоциаторы серии DSC, которые позволяют стандартизовать процедуру получения первичных клеточных линий из органов и добиться максимального выхода живых клеток.
Использование протеолитических ферментов, в сочетании с механическим воздействием и при постоянной оптимальной температуре тают высокий выход клеток.
Серия клеточных диссоциаторов DSC представлена моделями, рассчитанными на одновременную обработку 2, 4 и 8 образцов.
Меню приборов позволяет установить на каждый образец свой индивидуальный протокол, для одновременной обработки нескольких типов тканей параллельно.
Демонстрация работы клеточного диссоциатора серии DCS, RWD
Наборы ферментов RWD — это оптимизированная комбинация протеолитических ферментов,для работы с конкретным типом ткани. Состав и концентрация ферментов подобрана таким образом, чтобы обеспечить максимально щадящий режим лизиса межклеточного матрикса и минимальное воздействие на сами клетки.
Под каждый набор ферментов в памяти диссоциаторов DSC созданы адаптированные и отработанными протоколы. Но при желании, пользователь может модифицировать имеющийся протокол или создать собственный.
Совместное использование наборов ферментов RWD и диссоциаторов DSC позволяет получить высокий выход клеток с максимальной выживаемостью даже из таких сложных образцов, как жировая ткань, мышцы, кожа, кишечник и мозг.
К каждому набору прилагается подробная пошаговая инструкция и протокол для диссоциатора DSC, что позволяет использовать прибор даже студентам!