Определить группу крови по системе AB0 с помощью реактивов можно методом прямой гемагглютинации (стандартный метод в лабораториях).
Что понадобится:
1. Образец крови: Цельная кровь с антикоагулянтом (ЭДТА, цитрат) или просто капля крови из пальца.
2. Реактивы:
Цоликлоны: Синтетические аналоги антител (моноклональные антитела). Основные:
- Анти-А (голубой флакон/этикетка): Содержит антитела против антигена А.
- Анти-В (желтый или красный флакон/этикетка): Содержит антитела против антигена В.
- Анти-D (прозрачный/бесцветный флакон, для резус-фактора): Содержит антитела против антигена D (определяет Rh+ или Rh-).
Или Стандартные гемагглютинирующие сыворотки: Сыворотки крови людей с известными группами, содержащие естественные анти-А и/или анти-В антитела (используются реже, чем цоликлоны).
3. Оборудование:
- Чистая белая тарелка (пластиковая или стеклянная) или планшет с лунками.
- Стеклянные или пластиковые палочки (для каждого реактива своя!) или уголки предметного стекла.
- Пипетки (для крови и реактивов).
- Физиологический раствор (0.9% NaCl) для промывки эритроцитов (если используете отмытые эритроциты).
- Перчатки.
Пошаговая методика (с использованием цоликлонов):
1. Подготовка образца (если нужно):
Если у вас цельная кровь с антикоагулянтом, ее можно использовать сразу.
Если у вас кровь без антикоагулянта (капля из пальца), быстро приготовьте суспензию эритроцитов: смешайте 1 маленькую каплю крови с 1 каплей физраствора в отдельной пробирке или на тарелке.
2. Подготовка планшета/тарелки:
Промаркируйте области: "Анти-А", "Анти-В", "Анти-D" (если определяете резус).
Нанесите по одной большой капле (около 0.1 мл) каждого цоликлона в соответствующую промаркированную область. Используйте отдельные пипетки для каждого реактива!
Рядом с каплей каждого цоликлона нанесите по одной маленькой капле (примерно в 5-10 раз меньше, чем реактива) исследуемой крови или суспензии эритроцитов.
3. Смешивание:
Чистой отдельной палочкой (или уголком предметного стекла) для каждой пары (Анти-А + кровь, Анти-В + кровь, Анти-D + кровь) тщательно перемешайте капли крови с каплями реактива в пределах своей области.
4. Инкубация и наблюдение за агглютинацией:
- Осторожно покачивайте тарелку/планшет.
- Агглютинация (склеивание эритроцитов) обычно начинается в первые 10-30 секунд.
Как выглядит агглютинация:
- Положительная реакция (+): В смеси образуются хорошо видимые невооруженным глазом хлопья или зерна красного цвета на фоне просветленной или почти бесцветной жидкости. Хлопья не распадаются при покачивании.
- Отрицательная реакция (-): Смесь остается равномерно мутной (гомогенной суспензией) или слегка зернистой, но без образования четких хлопьев. При покачивании видно равномерное "красное облачко".
5. Интерпретация результатов (Группа AB0):
6. Определение резус-фактора (Rh):
Реакция в капле с Анти-D:
- Агглютинация (+): Кровь Rh-положительная (Rh+).
- Отсутствие агглютинации (-): Кровь Rh-отрицательная (Rh-).
Спасибо за просмотр! Надеюсь, что данная статья была вам полезна)