Найти в Дзене
Домашняя лаборатория

Окрашивание полисахаридов с использованием реактива Шиффа

Этим методом выявляют гликогеноподобные вещества. 1. Мазок суспензии на предметном стекле фиксируют нагреванием. 2. На 5 минут на стекло наносят раствор перйодата [20 мл 4%-ной (вес/объем) йодной кислоты в воде, 10 мл 0,2М водного ацетата натрия и 70 мл 95%-ного этанола; защищать раствор от света!]. 3. Отмывают стекло 70%-ным (объем/объем) этанолом. 4. На 5 минут наносят на предметное стекло восстанавливающий раствор, содержащий 300 мл этанола, 5 мл 2Н соляной кислоты, 10 г йодистого калия, 5 г тиосульфата натрия (пятиводного), 200 мл дистиллированной воды. Восстанавливающий раствор готовят следующим образом: к раствору йодистого калия и тиосульфата натрия в дистиллированной воде сначала приливают этанол, а затем соляную кислоту. Смесь перемешивают и оставляют на некоторое время для выпадения в осадок серы, после чего собирают надосадочную жидкость. 5. Отмывают стекло 70%-ным (вес/объем) этанолом. 6. Окрашивают препарат реактивом Шиффа в течение 15—45 минут (точное время следует опреде

Этим методом выявляют гликогеноподобные вещества.

1. Мазок суспензии на предметном стекле фиксируют нагреванием.

2. На 5 минут на стекло наносят раствор перйодата [20 мл 4%-ной (вес/объем) йодной кислоты в воде, 10 мл 0,2М водного ацетата натрия и 70 мл 95%-ного этанола; защищать раствор от света!].

3. Отмывают стекло 70%-ным (объем/объем) этанолом.

4. На 5 минут наносят на предметное стекло восстанавливающий раствор, содержащий 300 мл этанола, 5 мл 2Н соляной кислоты, 10 г йодистого калия, 5 г тиосульфата натрия (пятиводного), 200 мл дистиллированной воды. Восстанавливающий раствор готовят следующим образом: к раствору йодистого калия и тиосульфата натрия в дистиллированной воде сначала приливают этанол, а затем соляную кислоту. Смесь перемешивают и оставляют на некоторое время для выпадения в осадок серы, после чего собирают надосадочную жидкость.

5. Отмывают стекло 70%-ным (вес/объем) этанолом.

6. Окрашивают препарат реактивом Шиффа в течение 15—45 минут (точное время следует определить экспериментально). Реактив Шиффа готовят следующим образом: 2 г основного фуксина растворяют в 400 мл кипящей дистиллированной воды, охлаждают до 50°С и фильтруют через фильтровальную бумагу. Добавляют к фильтрату 10 мл 2Н соляной кислоты и 4 г метабисульфита калия. Сосуд плотно закупоривают и оставляют на 12 ч в холодном темном месте. Добавляют такое количество 2Н соляной кислоты (10мл), чтобы при высыхании на предметном стекле реактив не давал розового налета. Реактив Шиффа хранят в темноте.

7. Несколько раз отмывают стекло раствором, состоящим из 2 г метабисульфита калия и 5 мл концентрированной соляной кислоты в 500 мл дистиллированной воды.

8. Отмывают препарат водопроводной водой и дополнительно окрашивают 0,002%-ным (вес/объем) водным раствором малахитового зеленого в течение 2—5 с.

9. Отмывают препарат водопроводной водой, подсушивают и микроскопируют.

Полисахариды окрашиваются в красный цвет, все остальные компоненты цитоплазмы — в зеленый.