Посмертное извлечение и криоконсервация спермы применяется для ее дальнейшего использования в ВРТ. Процедура была впервые описана Ротманом и была успешно использована для получения жизнеспособного потомства. Большая часть литературы посвящена противоречиям, связанным с этическими и юридическими аспектами процедуры, но так же остается немало клинических вопросов.
Оvic et al. изучили медицинскую информацию о получении спермы до/посмертно. В общей сложности из 148 рассмотренных случаев было получено 113 сперматозоидов, при этом самый длительный промежуток времени между смертью и получением жизнеспособной спермы составил 3 дня. Более того, из 136 введенных зрелых яйцеклеток 41% были оплодотворены, что привело к переносу 25 эмбрионов и 8 живорождений. Таким образом, в своем заключении они заявили, что получение спермы по крайней мере в течение 3 дней после смерти может привести к рождению здорового ребенка.
🟠Цель проекта- получение данных о сроках жизнеспособности сперматозоидов при их посмертном извлечении
🟠Пациенты и дизайн исследования🟠представленные в этом проспективном исследовании результаты были получены в ходе анализа данных пятерых здоровых мужчин с нормальным анализом спермы (ВОЗ, 2021).
Период воздержания составлял 2-7 дней. Все образцы были исследованы в лаборатории в течение от 30 мин до 1 ч после эякуляции. После первоначальной оценки образец спермы каждого мужчины разбавляли до 6,5 мл. После извлечения 0,5 мл для криоконсервации 6 мл разделили на три пробирки (по 2 мл в каждой).
➡️один образец выдерживали при комнатной температуре (23-25°c),
➡️второй - в инкубаторе (37°c),
➡️третий - в холодильнике при температуре 4°c.
После этого каждый день из каждой пробирки извлекали по 0,5 мл каждого образца, исследовали и подвергали криоконсервации. Неделю спустя все криоконсервированные образцы размораживали и тестировали на подвижность сперматозоидов и жизнеспособность. Для всех вышеупомянутых оценок (подвижности и жизнеспособности) были исследованы два разных образца из каждого образца и записано среднее значение.
🟠Результаты🟠
➡️средний возраст исследуемой популяции и ИМТ составили 40,4± 11,4 года и 25,8 ± 1,6 кг/м2 соответственно.
➡️анализ образцов свежей спермы показал, что средний объем, концентрация и подвижность составили 3,6±1,7 мл, 96±41 млн/мл и 61 ±19% соответственно.
➡️результаты анализа образцов спермы после размораживания в течение 4 дней "культивирования" в различных условиях представлены на рис. 1.
✅как и ожидалось, во время периода культивирования во всех трех различных экспериментальных условиях наблюдалось снижение как подвижности, так и жизнеспособности сперматозоидов.
✅при комнатной температуре размороженные сперматозоиды оставались подвижными и жизнеспособными до 96 ч;
✅те, которые хранились в холодильнике (4°c), были неподвижны уже через 48 ч культивирования, но сохраняли жизнеспособность до 72 ч. Через 96 ч подвижность и жизнеспособность были незначительными.
✅образцы спермы, выдержанные в инкубаторе (37°c), продемонстрировали худшие результаты уже после 48 ч культивирования.
🟠Обсуждение🟠
В исследовании представлены данные выживаемости размороженных сперматозоидов в течение 4 дней (96 ч) в различных условиях культивирования. Наилучший показатель был при комнатной температуре, а в инкубаторе - наихудший. Это наблюдение согласуется с известным пагубным воздействием нагрева на сперматогенез, с предполагаемой зависящей от температуры максимальной чувствительностью синтеза ДНК в яичках при 31°C, а для синтеза РНК и белка - при 37-40°c.
❗Тhomas et al. недавно сообщили о случае постмортального извлечения спермы с длительной жизнеспособностью и подвижностью. У 44-летнего пациента -афроамериканца, умершего от остановки сердца, было удалено яичко, через 13 ч после смерти была проведена биопсия, и были собраны 4 образца, которые были помещены во флаконы, содержащие промытую сперму, в холодильник при температуре 7,2°c. Сперма, полученная из яичка в морге, оставалась жизнеспособна и подвижна даже через 106 ч (> 4 дней) после вскрытия.
Более того, 106-часовой образец, содержащий измельченный придаток яичка и семявыводящий проток, и собранную тестикулярную жидкость, подвергли криоконсервации, а анализ после размораживания выявил жизнеспособность и подвижность сперматозоидов при содержании пентоксифиллина 5% и 1% соответственно❗
Данное исследование с использованием размороженной эякулированной спермы и отчет Томаса и др. предполагают, что посмертное извлечение спермы может быть успешно выполнено через несколько дней (по крайней мере, через 4 дня) после смерти. Временные рамки должны зависеть от сопутствующих заболеваний умершего и состояния, в котором содержался труп в период от наступления смерти до забора спермы. В отличие от Тhomas et al., основным ограничением данного исследования является тот факт, что эякулированная сперма, выдержанная в различных условиях культивирования, не совсем отражает условия, с которыми сталкиваются сперматозоиды в посмертном яичке/придатке яичка. Эякулированные сперматозоиды, будучи более зрелыми, с более высокой подвижностью и в сочетании с семенной жидкостью, могут фактически увеличить продолжительность жизнеспособности сперматозоидов по сравнению с посмертными сперматозоидами из яичек/придатков яичка. В случаях смерти человека за пределами центра, где должна быть проведена биопсия, оптимальное время для извлечения зависит от температуры, при которой хранилось тело,проведенные эксперименты показывают, что наиболее длительный период времени для успешного получения жизнеспособной спермы - это когда тело поддерживается при комнатной температуре. В случаях с более длительными сроками (более 3 дней) и при полной неподвижности сперматозоидов рекомендуется проверить жизнеспособность сперматозоидов до принятия решения о криоконсервации, чтобы должным образом проинформировать семью.
🟠заключение🟠
жизнеспособность размороженной эякулированной или посмертной спермы для репродуктивных целей является важным вопросом, особенно в свете растущего числа запросов на процедуры. Результаты настоящего исследования могут быть спроецированы/экстраполированы на посмертное извлечение сперматозоидов и способствовать принятию врачом и членами семьи решения о продолжении или отказе от подобных манипуляций, исходя из временных рамок между смертью и забором материала и состояния, в котором содержался труп.
❗Рекомендуемый срок должен составлять до 72 часов, если только труп не хранился при комнатной температуре, в таком случае он может быть дольше.
❗Разумно проверить жизнеспособность сперматозоидов перед замораживанием в тех случаях, когда присутствуют неподвижные сперматозоиды и временной интервал между смертью и получением сперматозоидов составляет 48 часов или более.