Эта икона была привезена в Успенский монастырь преподобного Иосифа Волоцкого в 1572 году на второй неделе Великого поста.
Этот образ отличается от других изображений Богородицы тем, что на его полях изображены склоненные архангелы, а также святые митрополиты Московские Пётр и Иона.
В 1588 году этой иконе посвятили надвратную церковь на Южных вратах Иосифо-Волоцкого монастыря. В конце XVII века в Москве возвели храм в честь этой иконы, а надвратную церковь Иосифо-Волоцкого монастыря освятили во имя святых апостолов Петра и Павла.
Молитва перед этой иконой:
О Всеми;лостивая Госпоже; Богоро;дице, Небе;сная Цари;це, всемо;щная Засту;пнице, непосты;дное на;ше упова;ние! Благодари;м Тя о всех благодея;ниих, росси;йским лю;дем от Тебе; бы;вших, отдре;вле и додне;сь от чудотво;рныя ико;ны Твоея; явле;нных. И ны;не, Преблага;я Влады;чице, при;зри на ны, гре;шныя и недосто;йныя рабы; Твоя;, яви; нам ми;лость Твою; и моли; Сы;на Твоего;, Христа; Бо;га на;шего, о е;же изба;витися нам от вся;каго зла и сохрани;тися ца;рствующим градо;м, вся;кому гра;ду и ве;си, и всей стране; на;шей, от гла;да, губи;тельства, тру;са, пото;па, огня;, меча;, наше;ствия иноплеме;нник и междоусо;бныя бра;ни. Сохрани; и умудри; па;стырей Це;ркве, е;же досто;йно пасти; ста;до Христо;во и пра;во пра;вити сло;во и;стины; укрепи; христолюби;вое всеросси;йское во;инство, пода;ждь дух сове;та и ра;зума военача;льником, градонача;льником и всем, Иже во вла;сти суть; низпосли; свято;е Твое; благослове;ние и всем правосла;вным христиа;ном, покланя;ющимся Ти и моля;щимся пред цельбоно;сною Твое;ю ико;ною. Бу;ди нам Засту;пница и Хода;таица пред Престо;лом Всевы;шняго, иде;же предстои;ши. К кому; у;бо прибе;гнем, а;ще не к Тебе;, Влады;чице? Кому; принесе;м сле;зы и воздыха;ния, а;ще не Тебе;, Пресвята;я Богоро;дице? Не и;мамы бо ины;я по;мощи, не и;мамы ины;я наде;жды, ра;зве Тебе;, Небе;сная Цари;це. Под Твой покро;в притека;ем: моли;твами Твои;ми низпосли; нам мир, здра;вие, земли; плодоно;сие, возду;ха благорастворе;ние, изба;ви ны от вся;ких бед и скорбе;й, от вся;ких неду;гов и боле;зней, от внеза;пныя сме;рти и от всех озлобле;ний враго;в ви;димых и неви;димых. Вразуми; и научи; ны, о Всеми;лостивая Засту;пнице, путь земна;го сего; жития; безгре;шно прейти;. Ты ве;си не;мощи на;ша, ве;си и согреше;ния на;ша, но и ве;ру ве;си, и упова;ние ви;диши: те;мже да;руй нам исправле;ние грехо;вныя жи;зни и умягчи; зла;я сердца; на;ша. Укрепи; в нас пра;вую ве;ру, вложи; в сердца; на;ша дух стра;ха Бо;жия, дух благоче;стия, дух смире;ния, терпе;ния и любве;, в до;брых де;лех преуспе;яние: изба;ви же нас от искуше;ний, от па;губных душевре;дных уче;ний, от неве;рия, развраще;ния и поги;бели ве;чныя. Тебе; у;бо про;сим, Пречи;стая Влады;чице, и припа;дающе пред свято;ю Твое;ю ико;ною, мо;лимся: умилосе;рдися на ны и поми;луй ны, в Стра;шный же день Суда; хода;тайством и заступле;нием Твои;м сподо;би ны ста;ти одесну;ю Сы;на Твоего;, Христа; Бо;га на;шего, Ему;же подоба;ет вся;кая сла;ва, честь и поклоне;ние, со Безнача;льным Его; Отце;м, и Пресвяты;м и Благи;м и Единосу;щным Его; Ду;хом, ны;не и при;сно, и во ве;ки веко;в. Ами;нь.
Память Волоколамской иконе совершается 16 марта.