Реакция агглютинации по Видалю (Widal test) – это серологический метод диагностики брюшного тифа и паратифов A и B. Реакция основана на выявлении антител (агглютининов) в сыворотке крови больного к O- и H-антигенам Salmonella typhi (возбудителя брюшного тифа) и Salmonella paratyphi A и B (возбудителей паратифов).
Принцип метода:
Реакция агглютинации – это иммунологическая реакция, в результате которой происходит склеивание (агглютинация) бактерий или других клеток, несущих на своей поверхности антигены, под воздействием специфических антител.
В реакции Видаля в качестве антигенов используют убитые культуры бактерий Salmonella typhi (О- и Н-антигены) и Salmonella paratyphi A и B (О- и Н-антигены). Сыворотку крови больного разводят в нескольких последовательных разведениях и добавляют к каждому разведению диагностикум, содержащий определенный антиген. Если в сыворотке присутствуют специфические антитела к данному антигену, то происходит агглютинация (образование хлопьев) бактерий.
Проведение реакции:
- Подготовка сыворотки: Берут кровь у больного, отделяют сыворотку и прогревают ее для инактивации комплемента (если это необходимо для конкретного варианта реакции).
- Разведение сыворотки: Сыворотку разводят последовательно в нескольких разведениях (например, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320 и т.д.). Используют физиологический раствор или специальный буферный раствор.
- Добавление антигенов: К каждому разведению сыворотки добавляют стандартные диагностикумы, содержащие известные концентрации О- и Н-антигенов Salmonella typhi и Salmonella paratyphi A и B.
- Инкубация: Пробирки или планшеты с реакционной смесью инкубируют при определенной температуре в течение определенного времени (обычно при 37°C на водяной бане или в термостате в течение нескольких часов). Могут использоваться различные варианты инкубации (например, ночная инкубация при комнатной температуре).
- Учет результатов: Визуально оценивают наличие или отсутствие агглютинации в каждом разведении. Результат реакции считается положительным, если наблюдается агглютинация в определенном разведении сыворотки.
Интерпретация результатов:
- Титр: Титром антител называют наибольшее разведение сыворотки, при котором еще наблюдается агглютинация. Например, титр 1:160 означает, что агглютинация наблюдалась в разведении сыворотки 1:160.
- Диагностический титр: Диагностическим титром считают титр, превышение которого свидетельствует о наличии инфекции. Диагностический титр варьирует в зависимости от региона и эпидемиологической обстановки. Обычно для брюшного тифа диагностическим титром считают титр 1:200 или 1:400 для О-антигена и 1:200 для Н-антигена.
- Нарастание титра: Более важным диагностическим признаком является нарастание титра антител в динамике (при исследовании сыворотки, взятой с интервалом в несколько дней). Нарастание титра в 4 раза и более свидетельствует об активной инфекции.
- О-антиген: О-антиген является соматическим антигеном бактерий Salmonella и свидетельствует о наличии активной инфекции.
- H-антиген: H-антиген является жгутиковым антигеном бактерий Salmonella и свидетельствует о перенесенной инфекции или вакцинации.
Преимущества и недостатки реакции Видаля:
Преимущества:
- Простота выполнения.
- Низкая стоимость.
Недостатки:
- Относительно низкая чувствительность и специфичность.
- Возможность получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
- Сложность интерпретации результатов (зависит от эпидемиологической обстановки и предыдущей вакцинации).
- Невозможность дифференцировать текущую инфекцию от перенесенной ранее или вакцинации (если не оценивается динамика титров).
Современные методы диагностики брюшного тифа и паратифов:
В настоящее время реакция Видаля постепенно заменяется более современными и точными методами диагностики брюшного тифа и паратифов, такими как:
- Бактериологический посев крови, кала, мочи: Выделение и идентификация возбудителя.
- ПЦР (полимеразная цепная реакция): Выявление ДНК возбудителя в биологических материалах.
- ИФА (иммуноферментный анализ): Выявление антител к антигенам Salmonella различных классов (IgM, IgG).
- Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА): Более чувствительный вариант реакции агглютинации.
Реакция агглютинации по Видалю остается полезным методом диагностики брюшного тифа и паратифов в условиях ограниченных ресурсов, однако ее результаты должны интерпретироваться с осторожностью и подтверждаться другими методами исследования.