ПЕРВОНАЧАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭЯКУЛЯТА ПОД МИКРОСКОПОМ. Пошаговая инструкция.

Привет!

Исследование спермы кажется нам, лаборантам рутинным делом, но для каждого мужчины – это как сдать завершающий отчетный государственный экзамен. Мужчина волнуется. Некоторые чувствуют мандраж. Это понятно. Ведь от этого зависит дальнейшие действия в обретении здоровья или качественное зачатие ребенка.

Про сбор образцов семени я писала на другом канале, Дзен не разрешает дублировать статьи, поэтому ссылку оставлю здесь. А эта ссылка про первоначальную мАкроскопическую оценку. Его можно оценить не открывая крышку пластикового контейнера, куда был собран биологический материал. Эти ссылки с другого канала, куда вы тоже можете подписаться.

Пожалуйста, не запутайтесь: мАкроскопическая оценка - оценка внешнего вида, мИкроскопическая оценка - оценка внутренности спермы, то есть сперматозоидов. Спасибо!

Ну, вот, семя мы получили. Направляемся в лабораторию изучать, как там дела у сперматозоидов.

САДИМСЯ ЗА МИКРОСКОП.

Настраиваем микроскоп под свое зрение.Микроскопическая оценка проводится под увеличением ×100, что означает ×10 объектива и ×10 окуляра.

Это увеличение позволяет нам увидеть:

1. · Формирование нитей слизи;
2. · Агрегацию и агглютинацию сперматозоидов;
3. · Наличие несперматогенных клеток (клетки эпителия, округлых клеток (лейкоциты и незрелые половые клетки), отдельные головки и жгутики сперматозоидов.

После этого проводим оценку при увеличении ×200 или ×400 (окуляр ×10, объективы ×20 или ×40.

Ø Оцениваем подвижность сперматозоидов;

Ø Определяем разведение, которое нужно для оценки точного числа сперматозоидов.

ПОЛНОЕ СМЕШИВАНИЕ И ПРЕДСТАВЛЕНИЕ ОБРАЗЦА СПЕРМЫ

Если пробу не перемешать и добиваться равномерного распределения сперматозоидов, то в разных аликвотах разных повторностей будут разные показатели параметров. К таким показателям относится:

1. Подвижность сперматозоидов;
2. Жизнеспособность;
3. Концентрация;
4. Морфология;

Для тщательного перемешивания эякулята аликвоту семени (определенную долю) перемешиваем в контейнере без образования пузырьков воздуха. Это можно достигнуть путем аспирации в одноразовую, пластиковую пипетку 10 раз. Нельзя использовать вортекс для перемешивания, так как сверхвысокие скорости могут повредить сперматозоиды.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ВЛАЖНОГО ПРЕПАРАТА

Для приготовления влажного препарата нужно перемешать образец спермы и взять аликвоту после того как сперматозоиды осядут на дне. Для взятия повторной аликвоты, нужно перемешать образец еще раз.

Объем аликвоты и величина покровного стекла должны быть стандартизированы таким образом, чтобы анализ выполняли на препарате с фиксированной глубиной около 20 мкм, чтобы сперматозоиды могли свободно двигаться.

Нужно взять 10 мкл на чистое предметное стекло, накрываемпокровным стеклом (22мм×22мм). Вес покровного стекла позводит эякулату равномерно распределиться.

Обязательно проследить, чтобы не образовались пузырьки между покровным и предметным стеклом. Оценку нцжно проводить очень быстро, чтобы препарат не сместился.

1. Если глубина меньше чем 20 мкм, ограничивается движение сперматозоидов.
2. Если же глубина больше, то сперматозоиды двигаются как в фокусе, так и вне его. Затрудняется оценка.
3. Если число сперматозоидов в разных полях зрения меняется, значит образец перемешан плохо, недостаточно. Нужно перемешать снова как описано выше.
4. Гомогенности может не быть и когда проба имеет аномальную консистенцию или аномальное разжижение. Такое бывает, когда сперматозоиды агрегируются и агглютинируются.

АГРЕГАЦИЯ СПЕРМАТОЗОИДОВ

Слипание либо неподвижных сперматозоидов друг с другом, либо подвижных сперматозоидов с нитями слизи, не сперматогенными клетками или дебрисом (мусор) считаем неспецифическиой агрегацией (рис.1).

Агрегация сперматозоидов. Агрегация означает прикрепление сперматозоидов к другим клеткам: лейкоцитам, к клеткам эпителия и т.д.

Агглютинация сперматозоидов

Здесь речь идет о склеивании сперматозоидов головками к головке другого сперматозоида, головками к хвостику, хвостик к хвостику и комбинировать такие способы.

Иногда сперматозоиды склеившись, имеют некую подвижность, но иногда сперматозоиды склеились настолько, что вообще не могут быть подвижны (рис. 2). Все сперматозоиды склеившиеся каким-либо образом должны быть отмечены. Степени агглютинации сперматозоидов группируют следующим образом (рис.3):

Степень 1: ИЗОЛИРОВАННЫЕ (менее 10 сперматозоидов в одной кучке и большинство сперматозоиды более или менее свободны;

Степень 2: СРЕДНЯЯ СТЕПЕНЬ (10-50 сперматозоиды в одной кучке, сперматозоиды более или менее свободны;

Степень 3: ЗНАЧИТЕЛЬНАЯ СТЕПЕНЬ (в одной кучке более 50 сперматозоидов, только несколько сперматозоидов остаются свободны;
Степень 4: ТЯЖЕЛАЯ СТЕПЕНЬ (все сперматозоиды агглютинируют, агглютинаты взаимосвязаны.

Агглютинация сперматозоидов. Здесь виден целый островок из слипшихся сперматозоидов. Это высокая степень агглютинированности.

Двигающиеся сперматозоиды, которые прикрепились к дебрису (дебрис – это «мусор»), к округлым клеткам, к неподвижным сперматозоидам, к другому сперматозоиду как агглютинацию.

Степени агглютинации сперматозоидов. Руководство ВОЗ. По исследованию и обработке эякулята человека. Пятое издание. 2010 год.

Наличие агглютинированных сперматозоидов не говорит об иммунологическую причину бесплодия, но это означает, что присутствуют антиспермальные антитела и необходимо дальнейшее исследование.

НАЛИЧИЕ КЛЕТОЧНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ, ОТЛИЧНЫХ ОТ СПЕРМАТОЗОИДОВ.

Эякулят содержит клетки, которые не являются сперматозоидами. Это – эпитаелиальные клетки мочеполового тракта, лейкоциты и незрелые сперматозоиды – округлые клетки.

Здесь видны не только сперматозоиды, но и клетки, отличные от них. Чаще всего и в этом случае - это лейкоциты. О высокой концентрации лейкоцитов я напишу в следующих статьях, следите за мной.

На этом всё. Спасибо, что дочитали!

Предлагаю почитать другие мои статьи: