Мультиомиксное секвенирование ДНК одиночных клеток бластоцист человека.
Преимплантационное генетическое тестирование на анеуплоидию (ПГТ-А) предполагает, что средняя биопсия 5-6 клеток трофэктодермы не является достоверной для всего эмбриона.
НО!
- некоторые мозаичные эмбрионы могут привести к полностью хромосомно нормальному живорождению,
- а у нормальных эуплоидных плодов в плаценте могут наблюдаться анеуплоидные клеточные линии.
Вопрос на повестке дня:
является ли число копий хромосом трофэктодермы (TЭ) эмбрионов человека, восстановленных после переноса веретена (ST - spindle transfer), репрезентативным для внутренней клеточной массы (ВКМ)?
Дизайн исследования.
- 45 человеческих эмбрионов:
- 22 бластоцисты после ИКСИ;
- 23 бластоцисты после переноса веретена (ST);
- 1397 биопсийных клеток для секвенирования.
Выполнено одноклеточное мультиомиксное секвенирование на всех бластоцистах (чтобы предсказать и проверить вариации числа копий (CNV - это вид генетического полиморфизма) в каждой ячейке).
Определено число копий хромосом каждого эмбриона, анализируя долю аномальных клеток в каждой бластоцисте.
Полученные результаты.
Сравнение морфологической степени и скорости развития.
- Статистической разницы не выявлено.
Сравнение степени анеуплоидного мозаицизма.
Определение бластоцисты соответственно уровню мозаичности:
< 20% - эуплоидные;
> 20% < 80% - мозаичные;
> 80% - анеуплоидные.
- 17,01% (107/629) клеток в группе эмбрионов после ИКСИ;
- 22,66% (174/768) клеток в группе эмбрионов ST имели анеуплоидные клетки;
- разница в доле анеуплоидных клеток между ними была статистически значимой (P=0,009, RR 1,322).
Сравнение доли маломозаичных/эуплоидных бластоцист.
- Более высокая доля наблюдалась в группе ИКСИ (73,3% против 41,7%).
По мере увеличения уровня мозаицизма ТЭ уровень мозаицизма ВКМ не следует линейно, но когда уровень мозаицизма TЭ достигает умеренного и выше, ВКМ имеет тенденцию более соответствовать TЭ.
- В группе ИКСИ 3/45 бластоцист имели полностью нормальную эуплоидию и только 1 была полностью в норме в группе эмбрионов ST.
Выводы.
- Данное исследование оправдывает рутинное клиническое использование ПГТ-А в бластоцистах после ИКСИ, так как трофэктодерма является хорошей заменой внутренней клеточной массе в прогнозировании хромосомных аномалий.
- Что касается бластоцист после переноса веретена (ST), то они имеют повышенный уровень мозаицизма и неспособность трофэктодермы представлять количество хромосомных копий внутренней клеточной массы.
- В настоящее время эмбрионы ST не используется в клинических масштабах для получения бластоцист. Однако, если они станут широко использоваться в будущем, данное исследование докажет, что использование ПГТ-А в бластоцистах ST может быть не точным.