Соответствие числа копий хромосом между трофэктодермой и внутренней клеточной массой.

Мультиомиксное секвенирование ДНК одиночных клеток бластоцист человека. 

Преимплантационное генетическое тестирование на анеуплоидию (ПГТ-А) предполагает, что средняя биопсия 5-6 клеток трофэктодермы не является достоверной для всего эмбриона.

НО!

• некоторые мозаичные эмбрионы могут привести к полностью хромосомно нормальному живорождению,
• а у нормальных эуплоидных плодов в плаценте могут наблюдаться анеуплоидные клеточные линии.

Вопрос на повестке дня:

является ли число копий хромосом трофэктодермы (TЭ) эмбрионов человека, восстановленных после переноса веретена (ST - spindle transfer), репрезентативным для внутренней клеточной массы (ВКМ)?

Дизайн исследования.

• 45 человеческих эмбрионов:
• 22 бластоцисты после ИКСИ;
• 23 бластоцисты после переноса веретена (ST);
• 1397 биопсийных клеток для секвенирования.

Выполнено одноклеточное мультиомиксное секвенирование на всех бластоцистах (чтобы предсказать и проверить вариации числа копий (CNV - это вид генетического полиморфизма) в каждой ячейке).

Секвенирование ДНК одиночных клеток.

Определено число копий хромосом каждого эмбриона, анализируя долю аномальных клеток в каждой бластоцисте.

Полученные результаты.

Сравнение морфологической степени и скорости развития.

• Статистической разницы не выявлено.

Сравнение степени анеуплоидного мозаицизма.

Соотношение анеуплоидных клеток в двух группах бластоцист.

Определение бластоцисты соответственно уровню мозаичности:

< 20% - эуплоидные;

> 20% < 80% - мозаичные;

> 80% - анеуплоидные.

• 17,01% (107/629) клеток в группе эмбрионов после ИКСИ;
• 22,66% (174/768) клеток в группе эмбрионов ST имели анеуплоидные клетки;
• разница в доле анеуплоидных клеток между ними была статистически значимой (P=0,009, RR 1,322).

Сравнение доли маломозаичных/эуплоидных бластоцист.

• Более высокая доля наблюдалась в группе ИКСИ (73,3% против 41,7%).

Описание числа копий хромосом ТЭ и ВКМ в двух группах.

По мере увеличения уровня мозаицизма ТЭ уровень мозаицизма ВКМ не следует линейно, но когда уровень мозаицизма TЭ достигает умеренного и выше, ВКМ имеет тенденцию более соответствовать TЭ.

• В группе ИКСИ 3/45 бластоцист имели полностью нормальную эуплоидию и только 1 была полностью в норме в группе эмбрионов ST.

Выводы.

• Данное исследование оправдывает рутинное клиническое использование ПГТ-А в бластоцистах после ИКСИ, так как трофэктодерма является хорошей заменой внутренней клеточной массе в прогнозировании хромосомных аномалий.
• Что касается бластоцист после переноса веретена (ST), то они имеют повышенный уровень мозаицизма и неспособность трофэктодермы представлять количество хромосомных копий внутренней клеточной массы.
• В настоящее время эмбрионы ST не используется в клинических масштабах для получения бластоцист. Однако, если они станут широко использоваться в будущем, данное исследование докажет, что использование ПГТ-А в бластоцистах ST может быть не точным.