Техника замороженных срезов - ценный инструмент, используемый для быстрого приготовления криосрезов из ткани для микроскопического иследования.
Используется в клинических и исследовательских учреждениях. Хирург полностью полагается на замороженные участки ткани, чтобы определить степень удаления той или иной патологии.
Метод замороженных срезов используется для морфологических, иммуногистохимических и молекулярных методов. Это сложный технический процесс, требующий разработки усовершенствованных технических навыков.
Процесс резки
Отрегулируйте настройку микрометра криостата на «подрезку» толщиной 15 мкм и начните поворачивать маховик с ручкой микротома; образец будет продвигаться по этому установленному значению и вступает в контакт с ножом, а поверхность блока будет разделена.
Этот процесс называется «подрезкой блока, и цель состоит в том, чтобы достичь полного участка всей ткани. Как только это достигается, остановите микротомию и отрегулируйте настройку микрометра на требуемое значение, например, 5 мкм.
Почистите все обрезки с лезвия или края ножа и продолжайте резку уже с новым значением (5мкм).
Перед началом резки блока важно убедиться, что он правильно подрезан. На фотографии - блок (среда для криотомии), который нуждается в дополнительной подрезке (слева) и правильно подрезанный блок (справа).
Когда блок правильно подрезан, весь содержащийся в нём материал виден одинаково чётко и его поверхность не закрыта даже самым тонким слоем заливочной среды. Толщина среза измеряется микронами, и присутствие на поверхности минимального количества среды для заливки приведёт к тому, что часть ткани не попадёт в срез.
• На картинке показана микротомия ткани на криостате. Красная стрелка указывает на лезвие, зажатое в держателе лезвия. Гистотехник должен всегда знать о близости своей руки к лезвию, чтобы избежать травм при извлечении секций. Нужно быть предельно аккуратнее.
• Срезы свежей замороженной ткани будут прилипать к простым стеклам из-за наличия свободного белка и липида.
• Фиксированную замороженную ткань необходимо помещать на стёкла с полилизином , адгезивной поверхностью.
Как сохранить ткань после криотомии?
•Ткань после криотомии следует фиксировать немедленно, если она не будет храниться для дальнейшего изучения.
• Стандартный фиксатор в гистологии, такой как 10% нейтральный формалин, является наиболее подходящим фиксатором для замороженных тканей. Ткани свежезамороженные быстро сохнут при воздействии теплого воздуха, и это приведет к клеточному артефакту.
•Готовые срезы на стекле после микротомии нужно хранить в коробке обернутой в алюминиевую фольгу и немедленно переместить в морозильник -80 ° C, если не требуется дальнейшее исследование.
Дезинфекция криостата
•Для клинических пользователей необходима хорошая гигиена криостатов. После каждого использования следует удалить образцы стружки. Мусор помещены в желтый мешок класса «Б» . Стружки на стенках криостата можно протирать либо бумажным полотенцем, либо марлевым тампоном, смоченным в 70% спирте.
•Все пользователи должны нести ответственность за то, чтобы криостат поддерживался в чистоте, чтобы свести к минимуму риск заражения при вдыхании и снизить риск перекрестного загрязнения участка или образца ткани.
Время обработки ткани на криостате
•Поступивший на криотомию материал должен быть обработан за минимальное количество времени.
•Сначала требуется нанести гель на держатель придавить грузиком, которое есть в аппарате, требуется сделать плоскую поверхность.
•Далее ориентируем материал на приготовленный столик из геля, прижимаем грузиком.
•Устанавливаем на держатель.
•Подрезка изготовленного криоблока до появления образца на криосрезе.
•Наносим на маркированное стекло криосрез .
Автор статьи:
Юнусов Теймур Юнусович