Оранжевый G: смешивают раствор 0,5 г оранжевого G на 100 мл 96 % спирта и 0,015 г фосфорно-молибденовой кислоты. Полученный раствор оставляют на 1 сут, после чего он годен для использования.
Чтобы приготовить промежуточный краситель и бриллиантовый зеленый, необходимо за 1 сут приготовить следующие водные растворы:
основного коричневого – 0,1 г на 1 л дистиллированной воды;
эозина (желтого или обычного) – 0,1 г на 1 л дистиллированной воды;
бриллиантового зеленого – 0,05 г на 1 мл дистиллированной воды + 1 мл
96 % спирта.
Эти растворы необходимо плотно закрыть на 1 сут в термостате при 37°С.
Далее на них готовят спиртовые растворы красителей. Промежуточный краситель: основной коричневый – 1 мл водного раствора на 200 мл 96 % спирта (если эозин обычный – 1 мл водного раствора на 260 мл 96 % спирта). Для получения промежуточного красителя, представляющего собой смесь, берут следующие количества вещества на 100 мл смеси: 16 мл спиртового раствора основного коричневого, 84 мл спиртового раствора эозина (желтоватого или обычного), 0,17 г фосфорно-молибденовой кислоты и добавляют одну каплю насыщенного раствора карбоната лития. Красители фильтруют перед смешиванием, остаток хранят непрофильтрованным.
Бриллиантовый зеленый: 0,5 мл водно-спиртового раствора на 180 мл 96% спирта.
Препарат фиксируют в смеси Никифорова (минимальная продолжительность фиксации – 30 мин).
Промывают в 96 % спирте, а затем дистиллированной воде.
Окрашивают гематоксилином 2 – 3 мин, промывают в воде.
Дифференцируют 0,5 % раствором соляной кислоты до покраснения в течение 2 – 3 мин, сливают, промывают в воде. Контролируют под микроскопом окраску ядер.
Опускают на 1 мин в слабый раствор карбоната лития (три капли насыщенного водного раствора лития на 100 мл дистиллированной воды), промывают в воде.
Тщательно обезвоживают мазок 96 % спиртом.
Окрашивают оранжевым G в течение 1 мин, наливая краситель на стекло. Сливают краситель и хорошо промывают спиртом до удаления его избытка. Красят промежуточным красителем 1 мин, сливают, промывают в спирте. Окрашивают бриллиантовым зеленым 1 – 2 мин, сливают, промывают спиртом, промокают.
Проводят через ксилол, заключают в бальзам.