В последние годы применение проточной цитофлуориметрии (цитометрии) стало набирать популярность в ветеринарии и животноводстве, открывая новые возможности для диагностики как домашних, так и сельскохозяйственных животных, особенно при оценке иммунологического состояния.
Основным преимуществом проточной цитометрии является высокая скорость анализа частиц (до десятков тысяч в секунду) и получение статистически достоверных качественных и количественных данных по анализируемому образцу. При этом каждая клетка анализируется отдельно. С помощью проточной цитометрии можно изучать морфологию клеток, их поверхностные антигены, жизнеспособность, клеточный цикл, пролиферацию, апоптоз и пр.
Благодаря большому выбору моноклональных антител, конъюгированных с различными флуорохромами, в одном исследовании крови животных можно получить максимальную информацию о наличии или отсутствии различных патологий. Это позволяет ветеринарным врачам и исследователям проводить разнообразные анализы и получать точные результаты в кратчайшие сроки.
Компания Диаэм предлагает поближе познакомится с новыми проточными цитофлуориметрами (цитометрами) компании BioSino, Китай в нашей лаборатории в Москве, где Вы можете опробовать их в деле на своем образце!
Цитофлуориметр проточный, 1 лазер, 488 нм, 5 флуоресцентных параметров, 7S, BioSino
Цитофлуориметр проточный, до 3 лазеров, до 15 флуоресцентных параметров, SinoCyte, BioSino
Применение проточной цитометрии в ветеринарии и животноводстве
Проточная цитометрия может использоваться в ветеринарии для широкого спектра задач:
- Диагностика патологий крови. Например, выявление бешенства, паразитемий, различного вида анемий.
- Фармакодинамический мониторинг лекарственных препаратов для лечения животных. Например, исследование фармакодинамики циклоспорина – мощного лекарства, подавляющего выработку Т-клеток, используемого в ветеринарии для лечения воспалительных и аутоиммунных состояний.
- Анализ клеточных маркеров опухолевых клеток, определение их типа и степень злокачественности. Проточная цитометрия позволяет в кратчайшие сроки выявить острый лейкоз.
Примеры применения проточной цитометрии
В качестве примеров применения проточной цитометрии в животноводстве можно привести:
- Определение параметров коровьего молока в зависимости от состояния здоровья вымени.
Рис. 1. Стратегия гейтирования популяций лейкоцитов молока и экспрессии CD11b. A) Определение живых и мертвых клеток (LD-). B) Гейтирование CD45+ клеток в молоке. C) Отбор живых популяций лимфоцитов, макрофагов и полиморфноядерные лейкоциты (PMNs). D) Экспрессия CD11b на CD45+ клетках.
- Количественная оценка соматических клеток в коровьем молоке после различных физико-химических обработок. Ниже представлен протокол исследования молока.
Рис. 2. Краткое описание экспериментальной схемы подготовки соматических клеток и различных методов обработки: хранение в молоке или PBS в течение 72 ч, параметры центрифугирования и тепловой обработки.
- Количественное определение содержания ДНК спермы быков-производителей. Окрашивание образцов проводят красителем Hoechst 33342, который проникает в клетку и ядро и связывается избирательно с аденин-тиминовыми областями ДНК. Анализ сигнала флуоресценции позволяет исследователю дифференцировать X- и Y-сперматозоиды и разделить сперму по полу – получить сексированное семя, применение которого может существенно повысить продуктивность животноводческого предприятия.
Рис. 3. Схема получения сексированного семени быка-производителя с помощью проточной цитометрии.
Рис. 4. Гейтирование сперматозоидов, окрашенных Hoechst 33342. а) Отбор сперматозоидов по окраске FDA: область R1 – живые FDA-, R2 - мертвые FDA+. б) Гейтирование по окраске Hoechst 33342. (c) Гистограмма, показывающие два пика, соответствующие сигналам флуоресценции, генерируемым сперматозоидами, несущими Х- и Y-хромосомы.
В заключение, проточная цитометрия – это мощный инструмент, применение которого в диагностике и исследованиях значительно сокращает время получения результатов анализа образцов, способствуя таким образом улучшению качества ветеринарии и повышению комфорта и благополучия домашних и сельскохозяйственных животных.
Подробнее читайте здесь.