Преаналитика.
В настоящее время, все больше ветеринарных врачей отходят от долгосрочного эмпирического метода лечения животных, когда весь курс терапии подбирается скорее на основе опыта, и стараются корректировать первичные назначения на основе результатов лабораторных исследований. Это является крайне важной тактикой в лечении, особенно при подозрении на наличие в очаге поражения инфекционных агентов, так как бесконтрольный прием антибактериальных препаратов может приводить к таким нежелательным последствиям как токсическое поражение внутренних органов, в том числе печени, почек, органов кроветворения, возникновению аллергий, так и к развитию резистентности (невосприимчивости) микроорганизмов к антимикробным препаратам, в том числе к антибиотикам, от которой по данным ученых и ВОЗ (Всемирная организация здравоохранения) ежегодно умирает почти 1,3 миллионов человек по всему миру [1]. В ветеринарной практике, а конкретно среди животных компаньонов, точная статистическая обработка, по понятным причинам, невозможна, но есть основания предполагать о еще более плачевной ситуации.
Бактериологическое исследование позволяет оценить точный состав бактериальной микрофлоры в патологическом очаге у животного, причем как качественный, так и количественный. При этом важно не просто определить, есть бактерии в материале или нет, но так же установить видовую принадлежность микроорганизма, установить степень его патогенности и уровень чувствительности к различным антибиотикам, чтобы на основании этих данных ветеринарный врач мог назначить наиболее оптимальный препарат и его дозировку.
Идентификация микроорганизма является одним из самых трудоемких этапов бактериологического исследования. И, вопреки расхожему мнению, начинается он еще в кабинете врача, так как корректный способ отбора патологического материала у животного напрямую влияет на результат бак посева.
Преаналитика - это все процедуры, которые производятся еще до начала самого лабораторного исследования, но непосредственно влияют на получаемый результат [3].
В данный этап входят такие процессы, как:
- Подготовка животного к отбору материала на исследование;
- Отбор биоматериала из очагов поражения (кровь, моча, биоптат внутренних органов, аспираты и тд);
- Транспортировка полученного биоматериала в лабораторию;
- Первичная обработка биоматериала в лаборатории (регистрация проб);
- Распределение на исследование и организация хранения биоматериала в лаборатории.
Основная задача преаналитики сводится к обеспечению стабильной сохранности биоматериала и минимизации воздействия внешних факторов, которые могут привести к изменению состава исследуемой пробы. И, как можно видеть, сама лаборатория может повлиять только на два последних шага преаналитического этапа.
Для врача же крайне важно, во-первых, определить время взятия материала на бактериальный посев. Наилучший вариант отбора - до начала терапии. Если же антибиотики уже применяются, то необходимо выполнить забор до введения очередной дозы препарата, чтобы его концентрация в организме была минимальной, так как это может напрямую привести к искажению результатов исследования.
Во-вторых, правильно оценить характер и локализацию патологического процесса с учетом анамнеза, патогенеза и стадийности заболевания животного. Например, во многих случаях при подозрении на бактериальный цистит будет достаточно отобрать на анализ мочу, но порой результат может показать только биоптат слизистой оболочки мочевого пузыря, так как некоторые энтеробактерии, в том числе E. Coli при помощи пили (ворсинки, реснички на поверхности бактерии) адгезируются к клеткам эпителия и не выводятся с мочой, при этом вызывая хронический, рецидивирующий патологический процесс [2].
И наконец, необходимо совершать отбор материала в достаточном количестве с обязательным соблюдением асептических условий во избежание риска контаминации материала с кожи, ротовой/носовой полости, окружающей среды и тд [4].
Здесь, в кабинете врача, происходит первое взаимодействие материала со средой - транспортной средой Эймса, которая способствует выживаемости бактерий в клиническом материале в течении 48 часов при комнатной температуре (22 оС), при этом без значительного увеличения их роста. В связи с этим, данная среда является лучшим вариантом для отправки большей части клинического материала в лабораторию (аспират, биоптат, пунктат, малые порции мочи и тд), чтобы избежать ложноотрицательного результата, связанного с гибелью бактериальной микрофлоры во время транспортировки или ложноположительного из-за контаминации и порчи материала.
А, например, кровь при подозрении на бактериемию или сепсис необходимо сдавать исключительно во флаконах для гемокультивирования, которые являются универсальной питательной средой с колориметрическими индикаторами и адсорбентами, нейтрализующими антибактериальные препараты, которые могут циркулировать в организме животного и искажать результаты первичного посева на стандартные питательные среды. Это связано так же с ложными реакциями при взаимодействии крови с воздухом, факторами свертывания и другими реагентами, содержащимися в пробирках для различных исследований крови, сыворотки и плазмы. Кроме того, во флаконы можно сдавать и другие биологические жидкости в объеме более 2-3х миллилитров.
При поступлении в лабораторию материал вносится в журнал регистрации проб согласно приложенному направлению на анализ, маркируется внутрилабораторным номером и направляется на первичный посев.
Таким образом, преаналитика, как первый этап бактериологического исследования - это крайне важный комплекс действий для получения в дальнейшем достоверного результата, который во многом является зоной ответственности клинического специалиста.
дальнейшем достоверного результата, который во многом является зоной ответственности клинического специалиста.[П1]
1. Antimicrobial Resistance Collaborators. (2022). Global burden of bacterial antimicrobial resistance in 2019: a systematic analysis. The Lancet; 399(10325):P629-655. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21)02724-0
2. Spaulding CN, Schreiber HL 4th, Zheng W, Dodson KW, Hazen JE, Conover MS, Wang F, Svenmarker P, Luna-Rico A, Francetic O, Andersson M, Hultgren S, Egelman EH. Functional role of the type 1 pilus rod structure in mediating host-pathogen interactions. Elife. 2018 Jan 18;7:e31662. doi: 10.7554/eLife.31662. PMID: 29345620; PMCID: PMC5798934.
3. ГОСТ Р 53079.3-2008 Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Национальный стандарт РФ. Часть 3.
4. Инструкция по отбору и доставке материала на бактериологическое исследование. НВЛ Поиск, 2023