Эта публикация отражает содержание первой части вебинара «Клеточная биология в формате Single Cell», состоявшегося 11 октября 2022 г. в рамках проекта «Онлайн-лекторий Диаэм».
Татьяна Сульгина («Диаэм» - Новосибирск) рассказала о стандартизации пробоподготовки в цитологии, использовании клеточных диссоциаторов, магнитных сепараторов и счетчиков клеток от компании RWD для выделения клеток из образцов тканей и дальнейших действий с ними.
RWD: более двух десятилетий на мировом рынке
RWD Life Science (Китай) – производитель широкого спектра лабораторного оборудования для клеточной и молекулярной биологии, гистологии и ветеринарного оборудования для работы с лабораторными животными, существующий на рынке более 20 лет.
Для обеспечения точности, безопасности и надежности продукции, а также клиентоориентированности в RWD внедрены строгие стандарты контроля, управления и учета на каждом этапе высокотехнологичного производства.
Поэтому продукция RWD завоевала признание в более чем 100 странах мира, используются в более чем тысячах университетов, научно-исследовательских институтов и ветеринарных клиник и сотнях больниц.
Пробоподготовка в микробиологии происходит так: фрагмент ткани, полученный прижизненной биопсией или после смерти, измельчают механически, обрабатывают протеолитическими ферментами, расщепляющими внеклеточный матрикс: трипсином, коллагеназой, папаином или их комбинациями. В дополнение к ферментам используют кальций-связывающие соединения – хелаторы, которые забирают кальций у молекул клеточной адгезии и ослабляют связи их между собой и с внеклеточным матриксом. Добавление ДНКазы позволяет предотвратить склеивание клеток в текучие сгустки за счет электростатических взаимодействий.
Области применения первичных культур клеток
Традиционные сферы применения первичных клеточных культур – это:
- Иммунологические исследования;
- Исследования в области онкологии;
- Исследования иПСК (индуцированных плюрипотентных стволовых клеток);
- Нейронауки;
- Клеточная терапия.
Классические инструменты для измельчения образца – это, конечно, ступка и пестик.
Также применяется ротор-статор.
Его преимущества: быстрота и эффективность для отдельных образцов, модельный ряд под различные объемы – доступны модели как для лабораторий, так и для пилотных и промышленных производств. Но есть и минусы: иногда низкая пропускная способность; зонды необходимо промывать перед использованием, возможна перекрестная контаминация. Такой метод подходит для твердых и волокнистых образцов, но для них необходима еще и предварительная обработка, что является недостатком.
Гомогенизаторы также решают упомянутую задачу.
Всем известный FastPrep – универсальная система, подходящая для образцов любой твердости, в том числе, что важно отметить – для твердых и волокнистых образцов, которым в этом случае не нужна предварительная обработка. Это устройство простое в использовании и, что важно в новой реальности, возможны быстрые поставки. Но остается минус: каналы гомогенизатора необходимо промывать, и возможна перекрестная контаминация.
Его преимущества в том, что такая система универсальна, имеет большое количество каналов (4 или 8), которые можно запустить одновременно. Прибор прост в использовании, имеет дружественное для пользователя программное обеспечение, совмещает в себе механическую и ферментативную гомогенизацию. Возможен подогрев образцов, диссоциатор имеет валидированный протокол.
Что касается пробирок для такого гомогенизатора, они имеют пластиковые режущие (перетирающие) элементы из пластика. При одноразовом использовании они стерильны, но эта их одноразовость и представляет недостаток.
Сейчас предлагаются две модели диссоциаторов от RWD: DSC-400 и DSC-800.
Подробнее в статье на сайте.